Anticorps monoclonal de lapin anti-FTO pour WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - Q9C0B1

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la FTO

• La FTO (protéine associée à la masse grasse et à l’obésité) est une dioxygénase dépendante de l’alpha-cétoglutarate qui fonctionne comme une déméthylase de l’ARN. Également connue sous le nom d’ALKBH9, elle appartient à la famille des dioxygénases AlkB.
• Elle assure la déméthylation oxydative de la N6-méthyladénosine (m6A) dans l’ARNm, la modification interne la plus fréquente chez les eucaryotes supérieurs, régulant ainsi l’expression et la stabilité de l’ARNm. Références associées : PMID:22002720, PMID:25452335, PMID:26457839, PMID:30197295
• La FTO déméthyle également la N6,2'-O-diméthyladénosine (m6Am) présente dans les coiffes de l’ARNm, affectant la stabilité de l’ARNm en favorisant le décoiffage, et agit sur la m6A de l’ARNsn U6. Références associées : PMID:28002401, PMID:30197295
• Elle fonctionne comme une déméthylase des ARNt en éliminant la N1-méthyladénine et présente une faible activité envers la réparation de l’ADN/ARN alkylé, bien que son rôle in vivo dans la réparation de l’ADN demeure incertain. Références associées : PMID:30197295, PMID:18775698, PMID:20376003
• La localisation subcellulaire est principalement nucléaire, avec une présence dans les amas nucléaires et le cytoplasme.
• La FTO est exprimée de manière ubiquitaire, avec une expression élevée dans les glandes surrénales, le cerveau (hypothalamus et hypophyse), et elle est surexprimée dans certaines leucémies aiguës myéloïdes présentant des altérations génétiques spécifiques. Références associées : PMID:17434869, PMID:17496892, PMID:28017614
• Les modifications post-traductionnelles comprennent l’acétylation, la phosphorylation et la conjugaison de type ubiquitine, qui peuvent réguler son activité et sa stabilité.
• Elle joue un rôle crucial dans la régulation de la masse grasse, de l’adipogenèse, du poids corporel et de l’homéostasie énergétique, et participe à la thermogenèse et à la différenciation des adipocytes. Références associées : PMID:18775698, PMID:20376003, PMID:26287746
• Rôle oncogène dans la leucémie aiguë myéloïde par déméthylation de la m6A sur les transcrits d’oncogènes tels que MYC, CEBPA, ASB2 et RARA, favorisant leur expression. Références associées : PMID:28017614, PMID:29249359

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène est un peptide issu de la région N-terminale (aa 1-100), qui peut détecter la FTO entière ainsi que, potentiellement, certaines isoformes. Inclure des contrôles positifs et négatifs (par exemple, des lysats surexprimant la FTO ou des échantillons traités par siARN) afin de confirmer la spécificité.
• Pour le Western blot (WB), utiliser des échantillons protéiques réduits et dénaturés ; la taille de bande attendue est d’environ 58 kDa. Utiliser des contrôles de chargement et des conditions de blocage appropriés.
• Pour l’IHC-P et l’IF/ICC, tester différentes méthodes de fixation et de récupération antigénique. Les coupes incluses en paraffine peuvent nécessiter une récupération des épitopes induite par la chaleur. Valider la coloration à l’aide de tissus positifs connus (cerveau, glandes surrénales) et inclure des contrôles d’isotype.
• Pour l’immunoprécipitation (IP), l’anticorps peut convenir à la capture de complexes natifs de FTO. Optimiser les conditions du tampon de lyse et la quantité d’anticorps en fonction de la quantité totale de protéines utilisée.
• Pour l’ELISA, l’anticorps peut être utilisé dans des formats direct et sandwich ; optimiser les conditions de revêtement et de détection en fonction des exigences spécifiques de votre test.

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