Anticorps polyclonal anti-FKRP pour WB, ELISA - Q9H9S5

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la FKRP

• La FKRP (protéine apparentée à la fukutine) est une ribitol-5-phosphate transférase qui catalyse la deuxième étape de la formation de la répétition en tandem du ribitol-5-phosphate sur l'alpha-dystroglycane, une modification essentielle à la liaison à la matrice extracellulaire (PubMed:25279699, PubMed:26923585, PubMed:27194101, PubMed:29477842). Références associées : PMID:25279699 PMID:26923585 PMID:27194101 PMID:29477842
• Elle est essentielle à la glycosylation fonctionnelle de l'alpha-dystroglycane, qui assure les interactions avec la laminine et d'autres protéines extracellulaires, conférant une stabilité mécanique aux tissus musculaires et nerveux.
• Sa localisation subcellulaire comprend la membrane de l'appareil de Golgi, avec une présence supplémentaire au niveau du sarcolemme, du réticulum endoplasmique rugueux, du cytoplasme et sous forme sécrétée.
• La FKRP est principalement exprimée dans les muscles squelettiques, le placenta et le cœur, et plus faiblement dans le cerveau, les poumons, le foie, les reins et le pancréas (PubMed:11592034). Elle est également détectée au niveau protéique dans la rétine (PubMed:29416295). Références associées : PMID:11592034 PMID:29416295
• Les mutations de la FKRP sont associées à un éventail de dystroglycanopathies, notamment la dystrophie musculaire des ceintures, la dystrophie musculaire congénitale et la cardiomyopathie.
• La protéine contient une hélice transmembranaire, une séquence d'ancrage-signal et des sites conservés de liaison aux métaux (zinc/magnésium), qui sont essentiels à son activité de transférase.
• La FKRP appartient à la famille des ribitol-5-phosphate transférases et joue un rôle non redondant dans la voie de glycosylation de la dystroglycane, malgré la similitude de son nom avec celui de la fukutine.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond aux résidus 30 à 220 de la FKRP humaine, couvrant le domaine luminal N-terminal ; l'anticorps polyclonal obtenu peut détecter plusieurs épitopes et reconnaître la protéine native comme la protéine dénaturée. Confirmer la spécificité à l'aide de modèles knockout ou knockdown.
• Pour la Western blot, une bande d'environ 55 kDa est attendue dans des conditions réductrices. Envisager l'utilisation d'un gel à haute résolution et de détergents doux afin de résoudre les formes associées aux membranes ; valider dans des tissus pertinents tels que le muscle squelettique ou le placenta.
• Pour l'ELISA, l'immunogène recombinant peut servir de contrôle positif. Effectuer des titrations en damier afin d'optimiser les concentrations d'anticorps et d'antigène.
• Une réactivité croisée avec le rat a été observée, mais l'homologie de séquence avec d'autres espèces doit être examinée si d'autres modèles sont utilisés ; valider dans le système d'échantillonnage approprié.
• Compte tenu de la présence de la FKRP dans plusieurs compartiments subcellulaires, un fractionnement subcellulaire ou une immunoprécipitation peut améliorer la détection dans les échantillons faiblement abondants.

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