Anticorps polyclonal de lapin anti-ERK5 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13164

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’ERK5

• L’ERK5 (également appelée Big MAP kinase 1 (BMK-1) ou MAPK7) est une sérine/thréonine-protéine kinase appartenant à la famille des MAP kinases, qui joue un rôle essentiel dans la prolifération, la différenciation et la survie cellulaires.
• Elle est spécifiquement activée par la kinase MAP2K5 (MEK5) en amont, ce qui déclenche sa translocation vers le noyau où elle phosphoryle des facteurs de transcription tels que MEF2C.
• La stimulation par l’EGF active l’ERK5 via une voie dépendante de MAP2K5 mais indépendante de Ras, distincte de la cascade classique de signalisation ERK1/2.
• Dans les cardiomyocytes, l’ERK5 agit comme un régulateur négatif de l’apoptose en interagissant avec STUB1/CHIP afin de favoriser l’ubiquitination et la dégradation des isoformes pro-apoptotiques ICER de CREM.
• L’ERK5 contribue à la fonction endothéliale et à l’intégrité des vaisseaux sanguins, et pourrait être impliquée dans la différenciation des cellules musculaires.
• Elle phosphoryle SGK1 au niveau de Ser-78, une modification nécessaire à la progression du cycle cellulaire induite par les facteurs de croissance.
• Au niveau subcellulaire, l’ERK5 est présente dans le cytoplasme et le noyau, et se concentre dans les corps nucléaires PML lors de son activation.
• Elle est exprimée dans de nombreux tissus adultes, avec une abondance maximale dans le cœur, le placenta, les poumons, les reins et les muscles squelettiques, mais elle est indétectable dans le foie.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond à la région N-terminale (aa 1-310) de l’ERK5 humaine, ce qui peut permettre de détecter à la fois les isoformes pleine longueur et les isoformes tronquées à l’extrémité N-terminale. Une validation dans le système d’échantillon pertinent est recommandée.
• Pour le Western blot, une bande proche du poids moléculaire prédit de 88 kDa doit être attendue ; il convient d’envisager l’utilisation de lysats de contrôle positif appropriés (par exemple HeLa, HEK293 ou des échantillons tissulaires présentant une forte expression d’ERK5, tels que le cœur ou le muscle squelettique).
• En immunohistochimie (IHC-P) et en immunocytochimie (IF/ICC), une optimisation des étapes de récupération antigénique et de perméabilisation peut être nécessaire pour accéder aux pools nucléaires d’ERK5. Utiliser des tissus/cellules de contrôle positifs et négatifs afin de confirmer la spécificité de la coloration.
• Pour l’ELISA, qu’il soit utilisé comme anticorps de capture ou de détection, la réactivité croisée avec d’autres MAP kinases doit être évaluée ; il est recommandé d’effectuer des tests avec ERK1, ERK2 ou JNK recombinantes afin de confirmer la spécificité.
• Compte tenu de la réactivité croisée signalée avec la souris et le rat, cet anticorps convient aux études translationnelles chez ces espèces, mais un alignement des séquences de la région immunogène est recommandé afin de confirmer la conservation de l’épitope.

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