Anticorps polyclonal anti-EPS8 pour WB, ELISA - Q12929

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’EPS8

• L’EPS8 (substrat 8 de la kinase du récepteur du facteur de croissance épidermique) est une protéine adaptatrice de signalisation qui régule la dynamique du cytosquelette d’actine et contrôle des processus tels que la migration cellulaire et la fonction des cellules dendritiques. Elle a été initialement identifiée comme un substrat de la kinase du récepteur de l’EGF.
• La protéine fonctionne au sein d’un complexe trimérique avec SOS1 et ABI1 afin de transmettre les signaux de Ras à Rac en activant l’activité GEF spécifique de Rac, reliant ainsi la signalisation des facteurs de croissance au remodelage de l’actine.
• L’EPS8 présente deux activités distinctes de modulation de l’actine : le coiffage des extrémités barbées lorsqu’elle est liée à ABI1, ce qui inhibe la motilité, et la formation de faisceaux d’actine lorsqu’elle est associée à BAIAP2, favorisant les extensions filopodiales et les protrusions membranaires.
• Dans les neurones, l’EPS8 régule négativement la formation des filopodes axonaux par le coiffage de l’actine ; cependant, la phosphorylation induite par le BDNF inhibe cette activité de coiffage, permettant la croissance des filopodes.
• Au niveau des extrémités des stéréocils des cellules ciliées, l’EPS8 forme un complexe avec WHRN et MYO15A, essentiel à l’élongation du cœur d’actine. Les mutations de l’EPS8 sont associées à une surdité non syndromique (DFNB102).
• Au niveau subcellulaire, elle se localise au cortex cellulaire, dans les ondulations membranaires, les cônes de croissance, les stéréocils et les synaptosomes, ce qui est cohérent avec ses fonctions dans les protrusions membranaires dynamiques dépendantes de l’actine.
• La protéine contient un domaine SH3 et subit une phosphorylation ainsi qu’une ubiquitination ; sa dégradation médiée par l’ubiquitine est nécessaire au cours de la phase G2 pour les changements de forme cellulaire associés à la progression du cycle cellulaire.
• Elle est largement exprimée dans divers tissus, notamment le cerveau, le cœur, les poumons, le foie, les reins et le pancréas, ainsi que dans de nombreuses lignées cellulaires épithéliales et fibroblastiques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L’immunogène correspond à la région N-terminale (aa 1 à 200) de l’EPS8 humain, qui comprend une partie du domaine SH3 et la région N-terminale. Cette région est relativement conservée chez l’humain, la souris et le rat, ce qui explique la réactivité croisée. En cas de travail sur d’autres espèces, il est recommandé d’envisager un alignement des séquences.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est d’environ 92 kDa (sur la base d’UniProt : 91,9 kDa). Des bandes peuvent être observées près de cette taille ; toutefois, une phosphorylation ou d’autres modifications peuvent entraîner de légers décalages. Validez les résultats à l’aide de témoins positifs et négatifs appropriés.
• Pour les applications ELISA, utilisez une protéine EPS8 recombinante bien caractérisée ou des lysats cellulaires provenant de lignées dont l’expression est connue. Comme l’EPS8 est largement exprimée, choisissez un système présentant des niveaux d’expression modérés à élevés.
• Comme il s’agit d’un anticorps polyclonal, la constance entre les lots peut varier ; envisagez de réaliser des expériences pilotes lors d’un changement de lot, en particulier pour les dosages quantitatifs.

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