Anticorps polyclonal anti-EP300 pour IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q09472

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation d'EP300

• EP300 code l'acétyltransférase des histones p300, un coactivateur transcriptionnel multidomaine appartenant à la famille p300/CBP. La protéine contient un bromodomaine central et un domaine d'acétyltransférase des histones (HAT).
• p300 agit comme une acétyltransférase des histones capable d'acétyler les quatre histones centrales des nucléosomes, marquant ainsi la chromatine de manière épigénétique afin d'activer la transcription (PubMed:23415232, PubMed:23934153, PubMed:8945521). Références associées : PMID:23415232 PMID:23934153 PMID:8945521
• Elle acétyle spécifiquement l'histone H3 aux positions Lys-18, Lys-27 et Lys-122, ainsi que l'histone H4 aux positions Lys-5 et Lys-12. Ces modifications favorisent l'instabilité des nucléosomes et renforcent l'initiation de la transcription (PubMed:21131905, PubMed:23911289, PubMed:23415232, PubMed:37731000). Références associées : PMID:21131905 PMID:23911289 PMID:23415232 PMID:37731000
• Au-delà des histones, p300 acétyle de nombreux substrats non histoniques, notamment des facteurs de transcription (par exemple, STAT3, FOXO1), des enzymes métaboliques (PKM2, PCK1) et des protéines de réparation de l'ADN, modulant ainsi leur activité, leur stabilité et leur localisation (PubMed:15653507, PubMed:15890677, PubMed:24120661, PubMed:24939902). Références associées : PMID:15653507 PMID:15890677 PMID:24120661 PMID:24939902
• La protéine se localise dans le noyau, le cytoplasme et les chromosomes, ce qui reflète ses rôles diversifiés dans la transcription, la signalisation et le maintien de la structure de la chromatine.
• p300 participe à la régulation du rythme circadien en s'associant à CLOCK ou NPAS2, ce qui entraîne une acétylation rythmique des histones au niveau des promoteurs des gènes contrôlés par l'horloge (PubMed:14645221). Références associées : PMID:14645221
• EP300 est associé à plusieurs maladies : les réarrangements chromosomiques et les mutations sont liés à une déficience intellectuelle (syndrome de Rubinstein-Taybi de type 2) et à divers cancers. La protéine interagit également avec des protéines virales telles que E1A de l'adénovirus et Tat du VIH-1.

Recommandations expérimentales et conseils techniques

• L'immunogène comprend les 270 acides aminés N-terminaux de l'EP300 humain, incluant le domaine TAZ1 impliqué dans les interactions protéine-protéine. Cette région est spécifique d'EP300 et peut réduire la réactivité croisée avec la protéine étroitement apparentée CREBBP.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), envisagez d'optimiser la récupération antigénique et la concentration d'anticorps, compte tenu de la localisation nucléaire/cytoplasmique d'EP300 et de son poids moléculaire élevé (environ 264 kDa).
• L'ELISA peut servir de plateforme de détection quantitative ; validez l'essai avec une protéine EP300 recombinante ou des lysats cellulaires exprimant EP300 afin de garantir sa spécificité.
• Comme EP300 est une protéine volumineuse comportant plusieurs domaines, les conditions de Western blot (WB) en milieu dénaturant peuvent nécessiter des temps de transfert prolongés et un blocage soigneux afin de détecter la bande correspondant à la protéine pleine longueur.

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