Anticorps polyclonal anti-EP300 pour IHC-P, ELISA - Q09472

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’acétyltransférase des histones p300

• L’acétyltransférase des histones p300 (également connue sous le nom de protéine p300 associée à E1A, KAT3B) est un coactivateur transcriptionnel de grande taille (~264 kDa), codé par le gène EP300. Elle appartient à la famille d’acétyltransférases p300/CBP qui régulent la structure de la chromatine et l’expression génique.
• p300 agit comme une acétyltransférase des histones, en acétylant les quatre histones centrales des nucléosomes (H2A, H2B, H3, H4). Cette acétylation des histones constitue une marque épigénétique d’activation transcriptionnelle et peut également générer des marques doubles acétyle-méthyle (Kacme) sur les histones H3 et H4, associées à une chromatine active. Références associées : PMID:23415232 PMID:23934153 PMID:8945521 PMID:21131905 PMID:23911289 PMID:37731000
• Au-delà des histones, p300 acétyle de nombreuses protéines non histoniques, notamment des facteurs de transcription (p. ex. p53/TP53, ALX1, FOXO1, STAT3) et d’autres régulateurs (p. ex. HDAC1, SIRT2), modulant ainsi leur stabilité, leur liaison à l’ADN ou leur activité enzymatique. Elle participe également à la réponse aux dommages de l’ADN en acétylant l’histone H1 et PCNA. Références associées : PMID:11511361 PMID:15448695 PMID:15653507 PMID:12929931 PMID:18722353
• p300 présente une activité acyltransférase polyvalente, utilisant différents substrats acyl-CoA pour catalyser la crotonylation, la butyrylation, la 2-hydroxyisobutyrylation, la lactylation, la propionylation et l’isonicotinylation des histones, reliant ainsi le métabolisme à l’état de la chromatine. Références associées : PMID:17267393 PMID:25818647 PMID:29775581 PMID:31645732
• La localisation subcellulaire comprend le noyau, le cytoplasme et les chromosomes. La p300 nucléaire est recrutée au niveau des promoteurs par des facteurs de transcription spécifiques et intervient dans la régulation du rythme circadien par le biais d’interactions avec CLOCK/BMAL1. Référence associée : PMID:14645221
• p300 est un substrat de diverses modifications post-traductionnelles, notamment l’acétylation, la phosphorylation, la méthylation, la citrullination et l’ubiquitination, qui modulent finement son activité et ses interactions. Son bromodomaine reconnaît les lysines acétylées, et la protéine contient des motifs à doigt de zinc.
• Dans la pathogenèse virale, p300 est détournée par la protéine Tat du VIH-1 afin de faciliter la transcription provirale, et elle interagit avec la protéine E1A de l’adénovirus, ce qui la relie à la transformation cellulaire.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène est une protéine recombinante couvrant les acides aminés 940 à 1030, une région pouvant couvrir une partie du domaine catalytique HAT ou d’autres régions fonctionnelles ; cette conception peut convenir à la détection de la p300 entière et éventuellement à sa distinction de la CBP, qui lui est fortement homologue. Vérifiez la spécificité à l’aide de modèles knockout ou knockdown.
• Les applications recommandées par le fournisseur sont l’IHC-P et l’ELISA. Pour l’immunohistochimie, prenez en compte les conditions de récupération antigénique et optimisez la concentration de l’anticorps pour les profils de coloration nucléaire et cytoplasmique. Pour l’ELISA, validez le test avec une protéine p300 recombinante comme étalon.
• En raison de sa grande taille (264 kDa), utilisez une électrophorèse sur gel appropriée (p. ex. SDS-PAGE à 6-8 %) et des temps de transfert prolongés pour un western blot, le cas échéant.
• Selon les données du fournisseur, l’anticorps présente une réaction croisée avec la p300 de souris et de rat, ce qui permet son utilisation dans des modèles de rongeurs. Toutefois, confirmez la réactivité avec votre tissu ou votre lignée cellulaire spécifique.

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