Anticorps monoclonal anti-eNOS pour WB, IHC-P, ELISA - P29474

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'eNOS

• L'eNOS (NOS3) génère l'oxyde nitrique (NO), une molécule de signalisation gazeuse qui détend le muscle lisse vasculaire via le GMPc. Références associées : PMID:1378832
• Le NO provenant de l'eNOS stimule également l'angiogenèse coronaire induite par le VEGF et facilite la coagulation médiée par les plaquettes.
• Le gène NOS3 produit deux isoformes ; l'isoforme 2 manque d'activité catalytique et agit comme un régulateur dominant-négatif en formant des hétérodimères avec l'isoforme 1.
• L'eNOS se localise principalement dans les cavéoles de la membrane plasmique, mais elle est également associée à l'appareil de Golgi, au cytosquelette et au cytoplasme.
• Elle est exprimée dans les plaquettes, le placenta, le foie et les reins.
• L'eNOS est une enzyme multidomaine nécessitant du FAD, du FMN, du NADPH, de l'hème, du calcium et de la calmoduline pour son activité, et est régulée par la myristoylation, la palmitoylation et la phosphorylation.
• Elle appartient à la famille des synthases d'oxyde nitrique ; son poids moléculaire est d'environ 133 kDa.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène englobe le segment C-terminal (aa 1035–1110) de l'eNOS humaine, ce qui peut permettre de distinguer l'isoforme pleine longueur active des variants tronqués ; confirmer la spécificité en utilisant des tests spécifiques aux isoformes.
• Pour le transfert Western, une bande à ~133 kDa est attendue ; inclure des lysats endothéliaux (par exemple, HUVEC) comme contrôles positifs et utiliser des conditions réductrices appropriées.
• Dans l'analyse immunohistochimique (paraffine), la récupération antigénique (par exemple, tampon citrate, pH 6.0) et les tissus présentant une forte expression endogène d'eNOS (par exemple, placenta, rein) sont recommandés comme étapes de validation initiales.
• Les performances en ELISA dépendent du format de revêtement et du système de détection ; la réactivité croisée avec l'eNOS de rat et de souris permet une flexibilité dans les tests adaptés aux espèces.

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