Anticorps monoclonal de lapin anti-eIF4E [validé par KD] pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - P06730

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’eIF4E

• Le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 4E (eIF4E), également appelé eIF4E1, sous-unité de 25 kDa de l’eIF-4F ou protéine de liaison à la coiffe des ARNm, est codé par le gène EIF4E (ID du gène : 1977). Il exerce des fonctions distinctes dans le cytoplasme, où il intervient dans l’initiation de la traduction, et dans le noyau, où il participe à l’exportation des ARNm (PubMed:11606200, PubMed:22578813, PubMed:22684010).
  Références associées :
  PMID:11606200, PMID:22578813, PMID:22684010

• L’eIF4E reconnaît et se lie spécifiquement à la coiffe 7-méthylguanosine (m7G) située à l’extrémité 5' des ARNm, une étape essentielle qui facilite le recrutement des ribosomes et le déroulement des structures secondaires des ARNm (PubMed:16271312, PubMed:22578813). Avec EIF4G1, il permet la traduction dépendante de l’élément TISU, en contournant la nécessité du balayage ribosomique (PubMed:29987188).
  Références associées :
  PMID:16271312, PMID:22578813, PMID:29987188

• Au-delà de l’initiation, l’eIF4E régule la stabilité et le stockage des ARNm cytoplasmiques. Dans les P-bodies, il participe à un complexe qui séquestre les ARNm réprimés sur le plan traductionnel, empêchant leur dégradation (PubMed:24335285).
  Références associées :
  PMID:24335285

• L’eIF4E facilite l’exportation nucléaire d’un sous-ensemble d’ARNm, notamment NOS2/iNOS et MDM2, grâce à des interactions avec l’élément 4ESE et la voie d’exportation LRPPRC–XPO1, influençant ainsi des processus tels que l’apoptose et la progression du cycle cellulaire (PubMed:23471078, PubMed:22684010).
  Références associées :
  PMID:23471078, PMID:22684010

• Au niveau subcellulaire, l’eIF4E se localise dans le cytoplasme, les P-bodies, les granules de stress ainsi que dans le noyau, notamment dans les speckles et les corps nucléaires, ce qui reflète la diversité de ses fonctions.

• L’eIF4E est soumis à une phosphorylation, notamment au niveau de Ser209, qui module son affinité de liaison à la coiffe et son activité traductionnelle. Une acétylation a également été rapportée, et la protéine subit un épissage alternatif, produisant des isoformes dont les masses moléculaires sont d’environ 25 à 29 kDa.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène, un peptide synthétique couvrant les résidus 1 à 100 de l’eIF4E humain (NP_001959.1), cible la région N-terminale conservée. Compte tenu de l’homologie des séquences, une réactivité croisée avec les orthologues de souris, de rat et de singe est attendue, comme l’a confirmé le fournisseur.
• En western blot (WB), attendez-vous à observer des bandes correspondant aux isoformes de 25 kDa, 27 kDa et 29 kDa ; les contrôles de chargement et les conditions de blocage doivent être optimisés en fonction du type d’échantillon.
• En immunofluorescence (IF/ICC), l’eIF4E présente généralement un signal cytoplasmique diffus accompagné d’un marquage nucléaire ponctué ; les protocoles de fixation et de perméabilisation peuvent nécessiter des ajustements selon la lignée cellulaire.
• Cet anticorps est validé pour l’immunoprécipitation (IP) et l’ELISA ; pour les essais quantitatifs, incluez des contrôles positifs et négatifs appropriés.
• Comme l’eIF4E participe à plusieurs complexes, une IP en conditions natives peut entraîner la co-précipitation de partenaires d’interaction ; des conditions de lyse dénaturantes peuvent être utilisées pour isoler l’eIF4E total.

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