Anticorps polyclonal Anti-EIF3J pour WB, IF/ICC, ELISA - O75822

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'EIF3J

• Identité protéique : EIF3J (sous-unité J du facteur d'initiation de la traduction eucaryote 3), également appelé EIF3S1, eIF3-p35, eIF3-alpha, est codé par le gène EIF3J (ID de gène 8669). C'est une sous-unité centrale du complexe eIF3 d'environ 800 kDa.
• Fonction principale dans l'initiation de la traduction : EIF3J est un composant du complexe eIF-3, essentiel à la synthèse des protéines eucaryotes. eIF-3 s'associe à la sous-unité ribosomique 40S et facilite le recrutement de eIF-1, eIF-1A, du complexe eIF-2:GTP:méthionyl-ARNti et de eIF-5 pour former le pré-complexe d'initiation 43S (43S PIC). Il stimule également le recrutement d'ARNm vers le 43S PIC et la recherche du codon d'initiation AUG. Références associées : PMID:25849773, PMID:27462815
• Recyclage des ribosomes : Le complexe eIF-3 est nécessaire pour le désassemblage et le recyclage des complexes ribosomiques post-termination, empêchant l'association prématurée des sous-unités 40S–60S avant l'initiation.
• Rôle régulateur dans la traduction : Le complexe eIF-3 cible et contrôle sélectivement la traduction d'un sous-ensemble d'ARNm impliqués dans la prolifération cellulaire, la différenciation et l'apoptose, utilisant différents modes de liaison à des tiges-boucles ARNm pour exercer soit une activation soit une répression de la traduction. Références associées : PMID:25849773
• Localisation subcellulaire : Majoritairement cytoplasmique, ce qui est cohérent avec son rôle dans l'initiation de la traduction sur les ribosomes cytoplasmiques.
• Modifications post-traductionnelles : EIF3J peut être acétylé, phosphorylé, modifié par formation de liaison isopeptidique (de type ubiquitine) et ubiquitiné, comme l'ont montré les études protéomiques. Ces modifications pourraient réguler l'assemblage et l'activité du complexe.
• Épissage alternatif : Il existe plusieurs variants de transcrits pour EIF3J, pouvant produire des isoformes avec des fonctions ou des profils d'expression distincts.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été obtenu contre une protéine recombinante couvrant les acides aminés 1–258 de l'EIF3J humain. Cette région N-terminale est probablement conservée entre les espèces, ce qui explique la réactivité croisée observée avec la souris et le rat. Il devrait détecter l'EIF3J endogène de pleine longueur dans les espèces concernées.
• Western blot (WB) : Utilisez des lysats cellulaires totaux d'échantillons humains, de souris ou de rat. Le poids moléculaire prédit est d'environ 29 kDa. Validez la spécificité en incluant des contrôles de knockdown ou de surexpression, et optimisez les quantités chargées pour éviter la saturation.
• Immunofluorescence/ICC : EIF3J se localise dans le cytoplasme ; perméabilisez les cellules avec un détergent doux (par ex. 0,1 % Triton X-100) et bloquez avec un sérum adapté à l'espèce hôte. Testez des dilutions d'anticorps à partir de 1:50–1:200.
• ELISA : Confirmez la liaison en utilisant la protéine recombinante EIF3J ou un peptide correspondant à la séquence de l'immunogène. Optimisez la concentration de revêtement (typiquement 1–10 µg/mL) et les conditions de détection.
• Gestion des échantillons : Expédiez avec des sacs de glace ; à l'arrivée, conservez les aliquotes à -20°C jusqu'à -80°C. Évitez les cycles de gel-dégel répétés.

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