Anticorps monoclonal de lapin anti-ADN-PKcs pour WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P78527

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'ADN-PKcs

• L'ADN-PKcs (sous-unité catalytique de la protéine kinase dépendante de l'ADN), aussi appelé DNPK1, p460, HYRC ou XRCC7, est codé par le gène PRKDC (ID gène : 5591) et constitue la sous-unité catalytique du complexe ADN-PK.
• En tant que sérine/thréonine-protéine kinase, elle agit comme capteur moléculaire des dommages à l'ADN et est essentielle pour la jonction des extrémités non homologues (NHEJ), la voie principale de réparation des cassures double brin (DSB) et de la recombinaison V(D)J. Sa liaison à l'ADN est nécessaire pour son activité catalytique ; elle est recrutée par XRCC5/Ku80 et XRCC6/Ku70 aux extrémités de l'ADN, où elle protège, aligne et séquestre les extrémités cassées pour empêcher leur dégradation (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805). Références associées : PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805
• L'ADN-PKcs phosphoryle de nombreux substrats sur le motif consensus [ST]-Q, notamment l'histone H2AX au niveau du 'Ser-139' pour réguler la réponse aux dommages à l'ADN (PubMed:14627815, PubMed:16046194), p53/TP53, XRCC4, XRCC5, XRCC6, ainsi qu'AKT1 au niveau du 'Ser-473' pour promouvoir la signalisation de survie cellulaire (PubMed:10026262, PubMed:10467406, PubMed:11889123, PubMed:15262962). Références associées : PMID:14627815 PMID:16046194 PMID:10026262 PMID:10467406 PMID:11889123 PMID:15262962
• Au-delà de la réparation des DSB, l'ADN-PKcs contribue au maintien des télomères et empêche la fusion des extrémités chromosomiques (Par similarité).
• Il module également la transcription (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805) et favorise l'assemblage précoce des ribosomes en traitant l'ARNr précurseur en ARNr 18S mature dans le processosome de petite sous-unité, en interagissant avec l'ARN snU3 (PubMed:32103174). Références associées : PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805 PMID:32103174
• Dans l'immunité innée, l'ADN-PKcs régule la voie cGAS-STING en phosphorylant CGAS et PARP1, et fait partie du complexe HDP-RNP qui active IRF3 (PubMed:28712728, PubMed:33273464, PubMed:35460603). Références associées : PMID:28712728 PMID:33273464 PMID:35460603
• La protéine est principalement localisée dans le noyau et le nucléole, avec une certaine présence dans le cytosol, et est soumise à de multiples modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène englobe les acides aminés 3993 à 4128 de l'ADN-PKcs humain, une région C-terminale ; tenez compte de cet emplacement d'épitope lors de l'appariement avec d'autres anticorps ou de la conception de stratégies de détection.
• Pour le Western blot, la masse moléculaire prédite de la cible est de 469 kDa ; utilisez un pourcentage de gel adapté (par exemple 6 % de polyacrylamide) et des temps de transfert prolongés pour faciliter une efficacité de transfert optimale.
• Bien qu'il soit validé pour de multiples applications, les dilutions optimales doivent être déterminées de manière empirique dans le système expérimental de l'utilisateur final, en commençant par les gammes de concentration recommandées dans les protocoles standards.
• La réaction croisée est rapportée pour les échantillons humains ; pour des tissus ou lignées cellulaires non humains, réalisez un alignement de séquence interspécifique avant utilisation et validez avec des contrôles appropriés.
• L'ADN-PKcs étant une protéine nucléaire, ajustez les étapes de fixation et de perméabilisation pour l'immunofluorescence ou l'immunohistochimie afin de garantir une accessibilité correcte de l'antigène.

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