Anticorps monoclonal de lapin anti-DARPP32 pour WB, ELISA - Q9UD71

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de DARPP32 (PPP1R1B)

• DARPP32, codée par le gène PPP1R1B, est une molécule de transduction du signal bifonctionnelle qui intègre les signaux de la dopamine et de l'AMPc via sa régulation de la protéine phosphatase 1 (PP1) et de la protéine kinase A (PKA).
• Elle agit comme un puissant inhibiteur de PP1 lorsqu'elle est phosphorylée sur la Thr34 par la PKA, ce qui entraîne une modification de la phosphorylation des substrats neuronaux en aval et une modulation de la plasticité synaptique.
• La protéine est également phosphorylée sur la Thr75 par la kinase 5 dépendante des cyclines (CDK5), ce qui la convertit en un inhibiteur de la PKA, démontrant son rôle d'interrupteur moléculaire dans les neurones striataux.
• DARPP32 est principalement cytoplasmique et fortement enrichie dans les neurones épineux moyens du striatum, où elle médie les effets de la dopamine, du glutamate et d'autres neurotransmetteurs.
• L'épissage alternatif du transcrit PPP1R1B produit plusieurs isoformes, notamment une forme pleine longueur bien caractérisée et une variante tronquée, qui peuvent avoir des propriétés fonctionnelles distinctes.
• Des modifications post-traductionnelles telles que l'acétylation et la phosphorylation sur plusieurs sites affinent son activité, sa stabilité et sa distribution subcellulaire.
• La dérégulation de la signalisation DARPP32 a été associée à des troubles neurologiques et psychiatriques, notamment la maladie de Parkinson, la schizophrénie et la toxicomanie.
• Le poids moléculaire théorique de l'isoforme canonique est d'environ 23 kDa, ce qui correspond à la bande observée en Western blot.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot, utilisez un tampon RIPA fraîchement préparé contenant des inhibiteurs de phosphatases et de protéases pour préserver l'état de phosphorylation de DARPP32.
• Envisagez d'utiliser un tampon de chargement réducteur et de chauffer les échantillons à 70°C pendant 10 minutes pour éviter les artefacts d'agrégation couramment observés avec DARPP32.
• L'immunogène correspond à la région N-terminale (aa1-100) ; cet anticorps devrait reconnaître à la fois la forme pleine longueur et certains fragments N-terminaux.
• En raison de la forte conservation de la séquence, validez la spécificité de l'anticorps dans des échantillons de knock-out ou de knockdown par siRNA, en particulier lorsque vous travaillez avec des tissus de souris ou de rat.
• Pour l'ELISA, déterminez la concentration optimale de revêtement par titrage en damier en utilisant le peptide immunisant ou la protéine DARPP32 recombinante comme standard.
• Incluez un contrôle positif connu (par exemple, un lysat de tissu striatal) et un contrôle négatif (par exemple, une lignée cellulaire non neuronale) dans chaque expérience.
• Comme DARPP32 est une phosphoprotéine de faible abondance dans certains échantillons, des stratégies d'amplification du signal comme l'utilisation de substrats ECL haute sensibilité peuvent être nécessaires pour la détection.

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