Anticorps monoclonal de lapin anti-CYP51A1 pour WB, IHC-P, ELISA - Q16850

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CYP51A1

• CYP51A1, également connu sous le nom de lanostérol 14-alpha déméthylase, appartient à la superfamille des cytochromes P450 et est la seule enzyme cytochrome P450 conservée dans tous les règnes biologiques (bactéries, champignons, plantes et animaux). C'est une enzyme clé de la voie de biosynthèse des stérols, responsable de la conversion du lanostérol en cholestérol chez les mammifères.
• Activité catalytique : Elle catalyse l'élimination oxydative en trois étapes du groupe 14alpha-méthyle (C-32) des stérols tels que le lanostérol et le 24,25-dihydrolanostérol, produisant du formiate et les convertissant respectivement en 4,4-diméthyl-5alpha-cholesta-8,14,24-triène-3beta-ol et en 4,4-diméthyl-8,14-cholestadiène-3beta-ol. Ce sont des intermédiaires critiques dans la biosynthèse du cholestérol. Références associées : PMID:20149798, PMID:8619637, PMID:9559662
• L'enzyme est une protéine membranaire intégrale localisée dans le réticulum endoplasmique et les membranes microsomales, ce qui correspond à son rôle dans le métabolisme des lipides.
• Elle contient un groupe prosthétique hème et nécessite du fer comme cofacteur, caractéristique de l'activité monooxygénase qui utilise de l'oxygène moléculaire et du NADPH.
• CYP51A1 présente une large spécificité de substrat ; outre les stérols mammifères, elle peut déméthyler des substrats non mammifères comme l'éburicol, bien qu'avec une efficacité moindre. Références associées : PMID:9559662
• La protéine est exprimée de manière ubiquitaire, avec les niveaux les plus élevés observés dans les testicules, les ovaires, les glandes surrénales, la prostate, le foie, les reins et les poumons, reflétant la forte demande en cholestérol dans les tissus stéroïdogènes et la synthèse membranaire.
• L'épissage alternatif génère plusieurs variants de transcrits, modulant potentiellement la fonction ou la régulation de l'enzyme.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la conjugaison de type ubiquitine (Ubl), qui peut affecter la stabilité, la localisation ou l'activité de la protéine.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène utilisé est une protéine recombinante correspondant aux acides aminés 400-500 du CYP51A1 humain, ciblant la région C-terminale. Cette région est probablement bien exposée dans des conditions natives et dénaturées, ce qui rend l'anticorps adapté à de multiples applications.
• Pour l'analyse par Western blot (WB), une bande d'environ 57 kDa est attendue. Pensez à utiliser des marqueurs de poids moléculaire appropriés et à valider la spécificité en utilisant des lignées cellulaires ou des tissus positifs pour CYP51A1 (par exemple, foie, testicules).
• En immunohistochimie (IHC-P), une récupération antigénique peut être nécessaire. Testez sur des tissus témoins positifs connus tels que le foie ou la glande surrénale, et incluez des contrôles d'isotype pour confirmer les motifs de marquage spécifiques au niveau du réticulum endoplasmique.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de détection ou de capture. Associez-le à un étalon approprié, tel que l'immunogène recombinant ou la protéine CYP51A1 purifiée, et validez dans la matrice d'échantillon pertinente.
• Étant donné la forte homologie de séquence entre les CYP51A1 humain, murin et rat, une réactivité croisée est attendue. Cependant, une validation expérimentale pour chaque espèce est recommandée si elle est utilisée pour des échantillons non humains.
• Lors de la manipulation, stockez aux températures recommandées et évitez les cycles répétés de congélation-décongélation pour préserver l'activité.

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