Anticorps polyclonal de lapin anti-CXCL12/SDF-1 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P48061

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CXCL12

• Le CXCL12, également connu sous le nom de facteur dérivé des cellules stromales 1 (SDF-1), est une chimiokine CXC sécrétée qui existe sous plusieurs isoformes (alpha, bêta, gamma, delta, epsilon, thêta) en raison d'un épissage alternatif.
• Le CXCL12 agit comme un chimioattractant pour les lymphocytes T et les monocytes, mais pas pour les neutrophiles, en se liant et en activant le récepteur CXCR4, conduisant à une mobilisation rapide du calcium intracellulaire et à une migration cellulaire dirigée. Références associées : PMID:18802065, PMID:39093700, PMID:8752281
• Il se lie également au récepteur de chimiokine atypique ACKR3 (CXCR7), qui sert de récepteur éboueur et active la voie de signalisation de la bêta-arrestine. Références associées : PMID:16107333, PMID:19255243
• Le CXCL12 peut activer les intégrines ITGAV:ITGB3, ITGA4:ITGB1 et ITGA5:ITGB1 via un site de liaison allostérique, indépendamment du CXCR4. Références associées : PMID:29301984
• Il régule positivement la migration des monocytes et régule négativement l'adhésion des monocytes via un mécanisme médié par la kinase LYN qui inhibe la liaison de LFA-1 à l'ICAM-1. Références associées : PMID:18802065
• Une forme tronquée, le SDF-1-alpha(3-67), présente une activité chimiotactique réduite ; la liaison aux protéoglycanes de surface cellulaire inhibe sa formation, préservant ainsi localement l'activité du CXCL12 pleine longueur. Références associées : PMID:14525775
• Les isoformes alpha et bêta sont exprimées de manière ubiquitaire avec les niveaux les plus élevés dans le foie, le pancréas et la rate, tandis que l'isoforme gamma est principalement exprimée dans le cœur, et les isoformes delta, epsilon et thêta présentent la plus forte expression dans le pancréas.
• La protéine sécrétée mature contient des caractéristiques structurales importantes, notamment deux ponts disulfure et un peptide signal, avec un poids moléculaire d'environ 11 kDa.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 40–93 du CXCL12 humain (NP_000600.1), une région située dans le domaine de la chimiokine mature ; par conséquent, l'anticorps est censé reconnaître la protéine sécrétée. Pour le Western blot, préparez les échantillons dans des conditions réductrices et utilisez un protocole SDS-PAGE standard. Envisagez une gamme de dilution de départ de 1:500 à 1:2000, suivie d'une optimisation.
• Pour l'IHC-P, effectuez une récupération antigénique par la chaleur et validez la coloration avec des contrôles tissulaires appropriés. Le CXCL12 étant sécrété, des profils de coloration extracellulaires peuvent être observés.
• En IF/ICC, envisagez d'utiliser un inhibiteur de sécrétion (par exemple, la bréfeldine A) pour améliorer le signal intracellulaire ; optimisez les conditions de fixation/permeabilisation. L'anticorps peut marquer l'appareil de Golgi/la voie de sécrétion.
• L'anticorps réagit de manière croisée avec le CXCL12 de souris et de rat, ce qui le rend adapté aux études sur ces espèces. Cependant, confirmez toujours la spécificité dans le système modèle pertinent.
• En raison de l'épissage alternatif, plusieurs bandes peuvent être détectées en WB ; comparez avec les poids moléculaires connus des isoformes (alpha ~11 kDa). Utilisez un contrôle positif (par exemple, du CXCL12 recombinant ou des lignées cellulaires exprimant des niveaux élevés) pour vérifier la réactivité.

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