Anticorps monoclonal de lapin anti-CTCF pour WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP, ChIP-seq, CUT&Tag - P49711

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la CTCF

• La CTCF, également connue sous le nom de facteur de liaison CCCTC ou protéine à 11 doigts de zinc, est un facteur de liaison à la chromatine qui se lie à des sites d'ADN spécifiques et régule la structure 3D de la chromatine en formant des boucles et en ancrant l'ADN aux structures nucléaires. Références associées : PMID:16949368, PMID:18347100, PMID:18654629
• Elle définit les frontières entre l'ADN actif et l'ADN hétérochromatique en se liant aux isolateurs chromatiniens, empêchant les interactions entre les promoteurs et les amplificateurs (enhancers) et silencateurs (silencers) proches, médiant ainsi la répression génique à longue distance. Références associées : PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• La CTCF participe à l'expression génique allèle-spécifique au locus IGF2/H19 soumis à empreinte, en médiant la conformation chromatinienne d'ordre supérieur et en restreignant l'accès de l'amplificateur (enhancer) à IGF2 sur l'allèle maternel. Références associées : PMID:16107875, PMID:16815976, PMID:17827499
• Elle joue un rôle critique dans l'inactivation du chromosome X en établissant un interrupteur épigénétique régulable et en empêchant la propagation de la méthylation stable aux gènes d'échappement (escape genes). Références associées : PMID:11743158
• La CTCF est principalement localisée dans le noyau et s'associe aux centromères et aux bras chromosomiques pendant la métaphase, où elle est nécessaire à la localisation de la cohésine et à la cohésion des chromatides sœurs. Références associées : PMID:18550811, PMID:26321640
• Elle agit comme un répresseur transcriptionnel de MYC et BAG1 et comme un activateur transcriptionnel de APP, démontrant ses fonctions de régulation duales. Références associées : PMID:8649389, PMID:9591631, PMID:9407128
• La protéine contient plusieurs sites de modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la phosphorylation et la sumoylation (liaison isopeptidique), qui régulent ses activités de liaison à la chromatine et transcriptionnelles.
• La CTCF est exprimée de manière ubiquitaire dans les tissus humains mais est notablement absente dans les spermatocytes primaires, indiquant des rôles régulateurs spécifiques aux tissus.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 628–727 dans la région C-terminale de la CTCF humaine, un domaine distinct de la région de liaison à l'ADN des doigts de zinc, ce qui peut améliorer la spécificité de l'anticorps pour la CTCF endogène par rapport à d'autres protéines à doigts de zinc.
• Pour le Western blot, une bande attendue d'environ 83 kDa est prédite ; la migration réelle peut différer en raison des modifications post-traductionnelles ou des conditions de gel, il est donc recommandé de valider avec un contrôle positif connu.
• Pour l'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) et le ChIP-seq, optimisez les conditions de réticulation (crosslinking) et de fragmentation de la chromatine pour votre type cellulaire ; incluez des régions génomiques de contrôle positif (par exemple, H19 ICR) et négatif pour évaluer l'enrichissement.
• Lors de l'immunofluorescence, les protocoles de fixation et de perméabilisation doivent être testés empiriquement pour assurer une coloration nucléaire robuste ; une localisation sous-cellulaire dans le noyau et au niveau des centromères peut être observée.
• L'anticorps est adapté pour le CUT&Tag, offrant une alternative efficace au ChIP-seq avec un nombre de cellules inférieur ; la validation des conditions de marquage enzymatique et de la concentration d'anticorps est recommandée pour des résultats optimaux.

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