Anticorps polyclonal de lapin anti-CRY2 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q49AN0

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CRY2

• La Cryptochrome-2 (CRY2) est un composant central de l'horloge circadienne, agissant comme un répresseur transcriptionnel dans le bras négatif de la boucle de rétroaction transcription/traduction (TTFL). Elle interagit avec l'hétérodimère CLOCK/BMAL1 pour inhiber son activité transcriptionnelle.
• Avec CRY1, CRY2 régule la période circadienne ; bien que les deux aient des fonctions redondantes, CRY2 possède une activité répressive moins puissante dans le cervelet et le foie, et joue un rôle critique dans l'ajustement de la période circadienne du noyau suprachiasmatique (SCN) en s'opposant aux actions de CRY1.
• CRY2 est impliquée dans la modulation du métabolisme du glucose et des lipides, réprimant les gènes cibles de PPARD dans le muscle squelettique et régulant des gènes tels que LEP et ACSL4.
• Elle réprime l'activité transcriptionnelle induite par le récepteur des glucocorticoïdes (NR3C1/GR) en se liant aux éléments de réponse aux glucocorticoïdes, et réprime également la transcription de BHLHE40/DEC1 et NAMPT induite par CLOCK-BMAL1.
• Au niveau subcellulaire, CRY2 se localise à la fois dans le cytoplasme et le noyau, ce qui lui permet de faire la navette entre les compartiments dans le cadre de la régulation de l'horloge.
• Les modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation et l'ubiquitination, sont essentielles pour déterminer la période circadienne (tau) et la stabilité de CRY2.
• CRY2 est largement exprimée dans les tissus humains, avec des niveaux les plus élevés dans le cœur et le muscle squelettique, et est également présente dans le cerveau, le foie, les reins et bien d'autres.
• La protéine lie le FAD et pourrait avoir des propriétés photoréceptrices, bien que chez les mammifères, son rôle principal soit la régulation transcriptionnelle au sein du mécanisme de l'horloge.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à la région C-terminale (acides aminés 455-614), qui peut être bien exposée dans des conditions dénaturantes ; envisagez d'utiliser une SDS-PAGE réductrice pour le Western blot afin de détecter la bande de 67 kDa.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, optimisez les protocoles de fixation et de perméabilisation, car CRY2 se localise à la fois dans le cytoplasme et le noyau ; le méthanol ou le paraformaldéhyde avec du Triton X-100 peuvent donner des résultats différents.
• L'ELISA peut être utilisé pour la quantification ; envisagez une approche ELISA en sandwich avec une paire d'anticorps appariés, et validez la linéarité et la sensibilité en utilisant la protéine CRY2 recombinante.
• La réactivité croisée est confirmée pour les échantillons humains et de rat ; lors de l'utilisation d'autres espèces, effectuez un alignement de séquences et validez dans le système d'échantillonnage pertinent.
• Incluez des contrôles positifs appropriés (par exemple, lysats cellulaires HEK293, HeLa) et des contrôles négatifs (échantillons avec knockdown par siRNA ou knockout) pour confirmer la spécificité de l'anticorps.

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