Anticorps polyclonal Anti-COL4A5 pour WB, IF/ICC, ELISA - P29400

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de COL4A5

• La chaîne alpha-5 du collagène de type IV fonctionne comme le composant structurel majeur des membranes basales glomérulaires (MBG), formant un réseau en « grillage » avec les laminines, les protéoglycanes et l'entactine/nidogénine.
• La protéine est sécrétée et se localise dans l'espace extracellulaire, la matrice extracellulaire et les membranes basales.
• L'isoforme 2 présente une expression spécifique aux tissus dans le rein.
• COL4A5 est impliqué dans le syndrome d'Alport, un trouble génétique caractérisé par une maladie rénale progressive, une surdité neurosensorielle et des anomalies oculaires.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles, notamment l'hydroxylation et la glycosylation, et forme des ponts disulfure.
• Contient des domaines collagéniques répétitifs typiques des collagènes de type IV, contribuant à la formation de structures en triple hélice.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à la région C-terminale (acides aminés 1462-1691) du COL4A5 humain, qui se situe dans le domaine NC1. Ce domaine est impliqué dans l'assemblage des protomères et peut être bien présenté dans les extraits natifs de membranes basales.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est d'environ 161 kDa. Utilisez un gel de polyacrylamide à faible pourcentage (ex. 6-8 %) pour faciliter le transfert de cette protéine de poids moléculaire élevé, et envisagez des temps de transfert prolongés.
• En immunofluorescence/immunocytochimie, COL4A5 se localise dans les membranes basales. Pour une coloration optimale, utilisez des coupes de tissus congelés ou inclus en paraffine. Des méthodes de récupération d'antigène peuvent être nécessaires pour les coupes en paraffine ; consultez la littérature pour des protocoles spécifiques.
• Les applications ELISA peuvent bénéficier de l'utilisation de la protéine recombinante COL4A5 ou d'extraits de membranes basales comme antigène de revêtement. Validez la spécificité de l'anticorps avec des témoins positifs et négatifs appropriés.

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