Anticorps polyclonal de lapin anti-CLOCK pour WB, ELISA - O15516

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CLOCK

• CLOCK (Circadian Locomotor Output Cycles Protein Kaput), également appelé bHLHe8, est un composant central de l'horloge circadienne moléculaire qui induit des rythmes d'environ 24 heures dans l'expression génique, le métabolisme et le comportement (UniProt O15516).
• En tant que branche positive de la boucle de rétroaction transcriptionnelle/traductionnelle, CLOCK forme un hétérodimère avec BMAL1 (ou BMAL2) pour se lier aux éléments boîte E (5'-CACGTG-3') des promoteurs des gènes d'horloge centraux (PER1/2/3, CRY1/2) et des gènes contrôlés par l'horloge, activant ainsi la transcription.
• L'hétérodimère CLOCK-BMAL1 reconnaît préférentiellement le motif 5'-CACGTGA-3', où CLOCK se lie au demi-site 5'-CAC-3' et BMAL1 au demi-site 5'-GTGA-3' ; les motifs non canoniques 5'-AACGTGA-3' et 5'-CATGTGA-3' sont également reconnus. Références associées : PMID:23229515
• CLOCK possède une activité histone acétyltransférase intrinsèque, permettant le remodelage circadien de la chromatine en acétylant les histones (par ex. H3, H4) et les protéines non histones, y compris BMAL1 lui-même ; cette activité est aussi critique que la transcription pour la génération du rythme.
• Il acétyle l'argininosuccinate synthase 1 (ASS1) de manière circadienne, entraînant l'inhibition de l'activité enzymatique et le contrôle rythmique de la biosynthèse de l'arginine et de l'uréeogénèse, reliant ainsi l'horloge au métabolisme. Références associées : PMID:28985504
• CLOCK réprime l'activité transcriptionnelle du récepteur aux glucocorticoïdes NR3C1/GR en acétylant plusieurs résidus lysine dans la région charnière du récepteur, réduisant son association avec les éléments de réponse aux glucocorticoïdes. Références associées : PMID:21980503
• Au niveau subcellulaire, CLOCK est principalement nucléaire, mais il est également détecté dans le cytoplasme et le cytosol. Il est largement exprimé, avec des niveaux les plus élevés dans le testicule et le muscle squelettique, et il est fortement enrichi dans le noyau suprachiasmatique (SCN) du cerveau, l'horloge centrale.
• Les modifications post-traductionnelles telles que la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination ajustent finement la stabilité et l'activité de CLOCK, contribuant au contrôle oscillatoire précis des rythmes circadiens.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 450-600 de CLOCK humain, une région qui peut garantir la reconnaissance du domaine acétyltransférase et aider à détecter à la fois la forme pleine longueur et les isoformes potentielles ; pensez à vérifier la réactivité dans l'espèce et le tissu concernés.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit de CLOCK est de 95 kDa ; cependant, les modifications post-traductionnelles (par ex. phosphorylation, acétylation) peuvent décaler la bande observée. Utilisez des tampons de blocage et de détection appropriés, optimisés pour les anticorps polyclonaux de lapin.
• Pour l'ELISA, assurez-vous que le revêtement de protéine recombinante ou de peptide correspond à la région de l'immunogène pour maximiser la capture de l'anticorps. Titrez l'anticorps pour déterminer la concentration de travail optimale dans votre système d'essai.
• La réactivité croisée est indiquée pour l'homme, la souris et le rat ; validez-la dans votre organisme modèle d'intérêt à l'aide de contrôles positifs et négatifs. L'expression de CLOCK est circadienne, donc tenez compte de l'heure de prélèvement lorsque vous étudiez les niveaux endogènes.

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