Anticorps monoclonal anti-PARP clivé (Asp214) pour WB, IF/ICC, ELISA - P09874

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PARP1

• PARP1 est une poly-ADP-ribosyltransférase nucléaire qui médie la poly-ADP-ribosylation des protéines substrats, jouant un rôle central dans la réparation de l'ADN, le remodelage de la chromatine et la stabilité du génome (PubMed:17177976, PubMed:18055453, PubMed:18172500). Références associées : PMID:17177976 PMID:18055453 PMID:18172500
• Il catalyse l'ADP-ribosylation liée à la sérine, au glutamate et à la tyrosine, dont la spécificité de résidu est déterminée par les cofacteurs HPF1 et NMNAT1 (PubMed:28190768, PubMed:32028527, PubMed:29954836). Références associées : PMID:28190768 PMID:32028527 PMID:29954836
• Dans la réparation de l'ADN, PARP1 détecte les cassures de brins, recrute les facteurs de réparation et favorise la relaxation de la chromatine pour faciliter l'excision de bases et la réparation des cassures double brin (PubMed:26344098, PubMed:30356214, PubMed:19344625). Références associées : PMID:26344098 PMID:30356214 PMID:19344625
• Pendant l'apoptose, PARP1 est clivée par les caspases-3 et -7 au niveau de l'Asp214, générant un grand fragment catalytique (∼89 kDa) qui se transloque dans le cytoplasme et agit comme transporteur de poly-ADP-ribose, déclenchant l'apoptose médiée par AIFM1 (PubMed:33168626). Références associées : PMID:33168626
• La localisation subcellulaire est majoritairement nucléaire et nucléolaire dans des conditions normales ; après clivage, le fragment catalytique se relocalise dans le cytoplasme.
• PARP1 subit de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, l'ADP-ribosylation (automodification), la phosphorylation et l'ubiquitination, qui régulent son activité et ses interactions.
• Au-delà de la réparation de l'ADN, PARP1 intervient dans la régulation de la transcription, la progression des fourches de réplication, l'adipogenèse et l'immunité innée en modulant l'activité des protéines et la structure de la chromatine (PubMed:15607977, PubMed:22464733, PubMed:35460603). Références associées : PMID:15607977 PMID:22464733 PMID:35460603

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps cible le néo-épitope au niveau de l'Asp214 ; il détecte donc spécifiquement le fragment de PARP clivé et non la PARP pleine longueur. Pour le western blot, traitez les cellules avec des inducteurs d'apoptose (par exemple la staurosporine ou l'étoposide) pour enrichir le fragment d'environ 89 kDa.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, prévoyez une fixation après induction de l'apoptose pour observer la localisation cytosolique du fragment clivé. Validez la spécificité du marquage dans votre système expérimental avec des contrôles appropriés.
• La compatibilité avec l'ELISA a été démontrée ; lors de la conception des essais, prévoyez d'utiliser un fragment de PARP clivé recombinant ou un peptide comme étalon et optimisez les conditions de revêtement et de détection.

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