Anticorps monoclonal lapin anti-Chk1 pour WB, IHC-P, ELISA - O14757

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Chk1

• Encodée par le gène CHEK1, la sérine/thréonine-protéine kinase Chk1 subit un épissage alternatif pour produire plusieurs isoformes, y compris un isoforme répresseur endogène qui antagonise le Chk1 de pleine longueur pour favoriser la transition de la phase S vers G2/M.
• Agit comme une kinase de point de contrôle critique, nécessaire pour l'arrêt du cycle cellulaire et l'activation de la réparation de l'ADN en réponse aux dommages à l'ADN ou à l'ADN non répliqué, via la reconnaissance de la séquence consensus de substrat [R-X-X-S/T]. Références connexes : PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Phosphorylle CDC25A, CDC25B et CDC25C, créant des sites de liaison pour 14-3-3 ou les amorçant pour la polyubiquitination médiée par NEK11 et la dégradation, inhibant ainsi les complexes CDK-cycline et bloquant la progression du cycle cellulaire. Références connexes : PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• Améliore la réparation de l'ADN par recombinaison homologue en phosphorylant RAD51 au résidu Thr-309, favorisant la libération de RAD51 de BRCA2 et augmentant son association à la chromatine. Références connexes : PMID:15665856
• Phosphorylle l'extrémité C-terminale de TP53, améliorant son acétylation et son activité transcriptionnelle pour favoriser l'arrêt du cycle cellulaire et supprimer la prolifération. Références connexes : PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Modifie la structure de la chromatine et l'expression des gènes en phosphorylant l'histone H3.1 au résidu Thr-11 (H3T11ph), conduisant au silence épigénétique d'un sous-ensemble de gènes (Par similitude).
• Se localise dans le noyau, les chromosomes, le cytoplasme et le centrosome, reflétant ses rôles multiples dans le contrôle du cycle cellulaire et le maintien du génome.
• Exprimé de manière ubiquitaire avec les niveaux les plus élevés dans le thymus, les testicules, l'intestin grêle et le côlon, des tissus ayant des taux de prolifération élevés.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 1-100 à l'extrémité N-terminale ; envisagez de confirmer la spécificité de l'épitope par compétition peptidique ou par mutants de délétion dans votre système d'essai.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire attendu est d'environ 54 kDa ; utilisez un gel SDS-PAGE à 10 % et optimisez les conditions de transfert pour la détection de poids moléculaires élevés.
• En immunohistochimie (paraffine), une récupération de l'antigène avec du tampon citrate (pH 6,0) peut être nécessaire ; incluez le thymus ou les testicules comme tissus de contrôle positif et l'isotype IgG de lapin comme contrôle négatif.
• Pour l'ELISA, les formats direct ou sandwich peuvent être évalués ; envisagez des essais compétitifs avec le peptide d'immunisation pour valider la spécificité de la liaison.
• Cet anticorps est validé pour la réactivité humaine ; la réactivité croisée avec d'autres espèces n'a pas été déterminée, une validation spécifique à l'espèce est donc recommandée si l'on étend l'utilisation à d'autres modèles.

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