Anticorps polyclonal anti-Chk1 pour WB, ELISA - O14757

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Chk1

• Chk1 (Checkpoint kinase 1) est une sérine/thréonine protéine kinase appartenant à la superfamille des protéines kinases, avec un domaine kinase conservé et une poche de liaison à l'ATP.
• Elle est nécessaire à l'arrêt du cycle cellulaire médié par les points de contrôle et à l'activation de la réparation de l'ADN en réponse à des dommages de l'ADN ou à un ADN non répliqué, et reconnaît la séquence consensus du substrat [R-X-X-S/T]. Références associées : PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Chk1 phosphoryle les phosphatases CDC25 (CDC25A, CDC25B, CDC25C), créant des sites de liaison à la protéine 14-3-3 et favorisant la protéolyse de CDC25A, inhibant ainsi les complexes CDK-cycline et bloquant la progression du cycle cellulaire. Références associées : PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• La phosphorylation de TP53 sur plusieurs sites C-terminaux par Chk1 favorise son acétylation et son activation, conduisant à l'arrêt du cycle cellulaire et à la suppression de la prolifération. Références associées : PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Chk1 joue un rôle direct dans la réparation de l'ADN en phosphorylant RAD51 sur le résidu Thr-309 (renforçant la recombinaison homologue), FANCE (facilitant la réparation des liaisons croisées de l'ADN), et régule le maintien des fourches de réplication via PCNA. Références associées : PMID:15665856 PMID:17296736 PMID:18451105
• Chk1 module la chromatine par phosphorylation de TLK1 sur le résidu Ser-743, empêchant la phosphorylation d'ASF1A et améliorant potentiellement l'assemblage de la chromatine, et par phosphorylation de l'histone H3.1 sur le résidu Thr11 pour réguler la transcription génique. Références associées : PMID:12660173 PMID:12955071
• Un isoforme issu d'un épissage alternatif de CHEK1 agit comme répresseur endogène de la Chk1 pleine longueur, favorisant la transition de la phase S vers la phase G2/M par interaction directe et antagonisme.
• Chk1 se localise dans le noyau, les chromosomes, le cytoplasme et les centrosomes. Elle est exprimée de manière ubiquitaire, avec des niveaux les plus élevés dans le thymus, les testicules, l'intestin grêle et le côlon.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Pour le Western blot, utilisez des conditions réductrices et préparez des lysats à partir de cellules ou de tissus connus pour exprimer Chk1, comme le thymus ou les testicules. Le poids moléculaire prédit est d'environ 54 kDa ; cependant, les modifications post-traductionnelles peuvent entraîner des décalages apparents.
• L'immunogène correspond aux acides aminés 148-307 de la Chk1 humaine, situé dans le domaine kinase. Bien que cette région soit très conservée dans l'isoforme canonique, nous recommandons une validation avec des contrôles appropriés pour évaluer la réactivité avec d'éventuels isoformes alternatifs.
• Cet anticorps polyclonal de lapin est validé pour l'ELISA et le WB. Pour les applications ELISA, envisagez d'utiliser une protéine Chk1 recombinante ou un fragment comme étalon, et optimisez la dilution de l'anticorps et les conditions de blocage pour votre format de test spécifique.
• En tant qu'anticorps polyclonal, une variabilité d'un lot à l'autre est possible. Nous recommandons de valider les performances dans votre système expérimental et d'inclure des contrôles positifs et négatifs appropriés.

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