Anticorps polyclonal anti-CFI pour WB et ELISA - P05156

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CFI

• Le CFI est une sérine protéase de type trypsine qui régule négativement toutes les voies du complément en clivant les chaînes alpha de C3b et C4b, inactivant ainsi ces opsonines clés.
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• Il nécessite des cofacteurs pour son activité, notamment le facteur H et C4BP en phase liquide, ainsi que la protéine cofacteur membranaire (CD46) et le récepteur du complément 1 (CR1) à la surface des cellules.
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• Sur les cellules hôtes saines, la dégradation du C3b déposé médiée par le CFI empêche l'activation autologue du complément, tandis que sur les cellules apoptotiques ou les microbes dépourvus de cofacteurs protecteurs, le C3b reste actif pour favoriser l'opsonisation et la clairance.
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• Le CFI est principalement exprimé dans le foie par les hépatocytes, mais on le trouve également dans les monocytes, les fibroblastes et les kératinocytes.
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• La protéine est sécrétée dans l'espace extracellulaire et circule dans le sang, exerçant sa fonction de régulation en phase liquide et à la surface des cellules.
• Le CFI contient des ponts disulfures, des sites de glycosylation et des motifs de liaison au calcium ; il est classé parmi les sérines protéases et est impliqué dans l'immunité innée. Des mutations sont associées à la dégénérescence maculaire liée à l'âge et au syndrome hémolytique et urémique.
• La masse moléculaire prédite de la protéine est d'environ 66 kDa et elle subit une glycosylation N-liée.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (aa 19-300) couvre la partie N-terminale du CFI humain, et reconnaît probablement à la fois le pro-CFI et la chaîne lourde mature ; tenez compte de cet élément lors de l'interprétation des profils de bandes.
• Pour le Western blot, la dilution de départ recommandée est généralement de 1:500 à 1:2000 ; une bande attendue proche de 66 kDa doit être observée en conditions réductrices, avec des bandes supplémentaires possibles dues à la glycosylation ou au traitement post-traductionnel.
• Pour l'ELISA, les conditions de test nécessitent une optimisation ; l'anticorps peut être utilisé pour la capture ou la détection d'antigène, mais validez l'appariement avec un anticorps complémentaire si vous utilisez un format sandwich.
• Lors de l'analyse d'échantillons de souris, vérifiez la réactivité ; bien que la réactivité croisée soit indiquée, l'intensité du signal peut différer de celle du CFI humain.
• Incluez toujours des contrôles positifs et négatifs appropriés, tels que des lysats de cellules exprimant du CFI (par exemple, lignées cellulaires dérivées d'hépatocytes) et du sérum appauvri en CFI.

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