Anticorps monoclonal lapin anti-CDKN1A/p21CIP1 pour WB, IHC-P, ELISA - P38936

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CDKN1A/p21CIP1

• Inhibiteur 1 des kinases dépendantes des cyclines, désigné CDKN1A, est également connu sous les noms de p21, CIP1, WAF1, SDI1, CAP20, CDKN1 et MDA-6. Il agit comme un régulateur puissant du cycle cellulaire.
• CDKN1A joue un rôle critique dans l'arrêt du cycle cellulaire médié par p53/TP53 en réponse à des dommages à l'ADN, bloquant la progression G1/S et permettant la réparation de l'ADN (PubMed:9106657). Références associées : PMID:9106657
• La protéine se lie aux complexes des kinases dépendantes des cyclines (CDK) et les inhibe, empêchant la phosphorylation de substrats clés tels que RB1, stoppant ainsi la progression du cycle cellulaire.
• À de faibles ratios stœchiométriques, CDKN1A favorise la localisation nucléaire et l'assemblage du complexe cycline D-CDK4, augmentant son activité kinase vis-à-vis de RB1, tandis qu'à des ratios plus élevés, il inhibe le complexe.
• CDKN1A entre en compétition avec POLD3 pour la liaison à l'antigène nucléaire des cellules en prolifération (PCNA), ce qui entraîne l'inhibition de la synthèse d'ADN par l'ADN polymérase delta (PubMed:11595739). Références associées : PMID:11595739
• La protéine se localise principalement dans le noyau, mais se trouve également dans le cytoplasme. Sa localisation nucléaire est essentielle pour l'inhibition des CDK, et son activité est modulée par des modifications post-traductionnelles : phosphorylation, acétylation et ubiquitination.
• CDKN1A est exprimé de manière ubiquitaire dans les tissus adultes, avec des niveaux environ cinq fois plus faibles dans le cerveau par rapport aux autres tissus.
• Outre son rôle canonique, CDKN1A participe à l'arrêt du cycle G2 induit par des dommages à l'ADN, indépendamment de p53, via la voie CREB3L1 dans les astrocytes et les ostéoblastes (Par similarité).

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène comprend les 164 acides aminés N-terminaux de CDKN1A/p21CIP1 humain, couvrant la protéine entière ; confirmez que l'anticorps détecte la p21 endogène à environ 18 kDa par Western blot.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P), un marquage nucléaire et cytoplasmique peut être observé. Optimisez la récupération d'antigène et la dilution de l'anticorps en utilisant des tissus contrôles positifs connus, tels que le carcinome du côlon ou les cellules en prolifération.
• Pour les applications ELISA, utilisez la protéine p21 recombinante ou des lysats cellulaires issus d'échantillons activés pour p53 pour établir les courbes d'étalonnage et valider la spécificité.
• Étant donné que l'expression de p21 est étroitement régulée par p53 et le stress cellulaire, envisagez de traiter les cellules avec des agents endommageant l'ADN (par exemple la doxorubicine) pour induire p21 avant la détection.

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