Anticorps polyclonal de lapin anti-CD73/NT5E pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P21589

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD73/NT5E

• Le CD73/NT5E code pour l'ecto-5'-nucléotidase, une protéine membranaire ancrée par un glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui catalyse l'hydrolyse des monophosphates de nucléotides extracellulaires en leurs nucléosides correspondants et en phosphate inorganique.
• Catalyse l'hydrolyse de l'AMP en adénosine et en phosphate inorganique, avec une préférence pour les monophosphates de ribonucléotides par rapport aux formes désoxyribose (PubMed:21933152, PubMed:22997138, PubMed:23142347, PubMed:34403084). Références associées :
• PMID:21933152
• PMID:22997138
• PMID:23142347
• PMID:34403084
• Présente une large spécificité de substrat, incluant l'IMP, l'UMP, le GMP, le CMP, le dAMP, le dCMP, le dTMP, le NAD et le NMN (PubMed:21933152, PubMed:22997138, PubMed:23142347). Références associées :
• PMID:21933152
• PMID:22997138
• PMID:23142347
• Localisée à la membrane cellulaire via une ancre GPI C-terminale, positionnant le site actif à l'extérieur de la cellule pour réguler la signalisation purinergique et les réponses immunitaires.
• Nécessite du zinc comme cofacteur pour l'activité catalytique ; l'enzyme contient un centre binucléaire de zinc essentiel pour l'hydrolyse des phosphates.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation N-liée et la formation de ponts disulfures, contribuant à la stabilité et à la fonction de la protéine.
• Les variantes génétiques du gène NT5E sont associées à la calcification artérielle due à une déficience en CD73 (ACDC), un trouble récessif autosomique rare.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux résidus 27–377 du NT5E humain, qui couvre la majorité du domaine extracellulaire ; cette conception favorise la détection du CD73 de surface cellulaire dans sa conformation native.
• Pour le transfert Western (Western blotting, WB), envisagez une plage de dilution de 1:500–1:2000, et notez que le poids moléculaire prédit est d'environ 63 kDa ; dans des conditions réductrices, les formes glycosylées peuvent apparaître légèrement plus élevées.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), la récupération de l'antigène avec un tampon citrate (pH 6,0) est souvent bénéfique ; validez sur un panel de tissus témoins positifs et négatifs.
• La réactivité croisée avec la souris et le rat a été démontrée, mais compte tenu des variations de séquence spécifiques à l'espèce, les dilutions de travail optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque test.
• En tant qu'anticorps polyclonal, la cohérence d'un lot à l'autre peut varier ; nous recommandons de titrer chaque nouveau lot et d'inclure des témoins positifs et négatifs appropriés dans chaque expérience.
• Pour les tests ELISA, le revêtement direct avec la protéine recombinante ou les formats capture-détection peuvent être testés ; effectuez des titrations en damier pour optimiser le rapport signal/bruit.

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