Anticorps monoclonal lapin anti-CD68 pour WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P34810

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD68

• Le CD68, également connu sous le nom de macrosialine, GP110, LAMP4 ou SCARD1, est une protéine transmembranaire de type I fortement glycosylée appartenant à la famille des glycoprotéines membranaires associées aux lysosomes/endosomes (LAMP). Il contient un domaine de type mucine et une hélice transmembranaire.
• L'épissage alternatif du gène CD68 génère plusieurs isoformes, ce qui peut contribuer à la diversité fonctionnelle dans différents types de cellules ou compartiments cellulaires.
• Le CD68 joue un rôle central dans les activités phagocytaires des macrophages tissulaires, participant à la fois au métabolisme lysosomal intracellulaire et aux interactions cellule-cellule et cellule-pathogène extracellulaires. Il se lie à des lectines ou des sélectines spécifiques de tissus et d'organes, facilitant ainsi l'adressage de sous-ensembles de macrophages vers des sites particuliers.
• La protéine subit un recyclage rapide entre les endosomes, les lysosomes et la membrane cellulaire, un processus dynamique qui peut permettre aux macrophages de ramper sur des substrats porteurs de sélectines ou sur d'autres cellules.
• À l'échelle subcellulaire, le CD68 se localise principalement à la membrane cellulaire, à la membrane endosomale et à la membrane lysosomale, ce qui est cohérent avec ses rôles dans le trafic vésiculaire et l'adhésion de surface.
• Le CD68 est fortement exprimé dans les monocytes sanguins et les macrophages tissulaires. On le trouve également, dans une moindre mesure, dans les lymphocytes, les fibroblastes, les cellules endothéliales et de nombreuses lignées cellulaires tumorales. Dans les tumeurs, l'expression du CD68 peut favoriser l'adhésion médiée par les sélectines à l'endothélium vasculaire, aidant potentiellement la dissémination métastatique.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent une glycosylation étendue N- et O-liée, ce qui explique que le poids moléculaire apparent de la protéine soit supérieur aux 37 kDa prédits sur SDS-PAGE. La protéine contient également des ponts disulfure et un peptide signal.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène utilisé est un peptide synthétique (aa 100‑200 du CD68 humain), ce qui suggère que l'anticorps reconnaît un épitope linéaire. Pour le western blot, les conditions réductrices et dénaturantes standard devraient convenir ; cependant, en raison de la forte glycosylation, la bande observée peut migrer au-dessus des 37 kDa prédits. Envisagez d'utiliser des enzymes de déglycosylation pour confirmer la spécificité si nécessaire.
• Pour l'immunofluorescence sur sections incluses en paraffine (IF‑P) et l'immunohistochimie (IHC‑P), la récupération de l'antigène est recommandée car le CD68 est une protéine membranaire souvent localisée dans des compartiments intracellulaires. Optimisez la fixation (par exemple, PFA à 4% ou formol) et la perméabilisation pour assurer l'accès à l'épitope dans les endosomes/lysosomes.
• Lors de l'utilisation de cet anticorps en ELISA, validez les performances par rapport à la protéine CD68 recombinante ou aux lysats de lignées cellulaires exprimant le CD68 (par exemple, monocytes/macrophages THP‑1) pour confirmer la sensibilité et la spécificité.
• Comme le CD68 est un marqueur des macrophages, incluez des témoins positifs appropriés (par exemple, lysats de macrophages humains) et négatifs (par exemple, échantillons CD68‑knockout ou témoins d'isotype) dans toutes les expériences pour vérifier la spécificité de la cible.

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