Anticorps monoclonal de lapin anti-CD68 pour WB, IF-P, FC (intra), ELISA - P34810

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD68

• CD68, également appelée macrosialine, GP110, LAMP4 et SCARD1, est une protéine transmembranaire de type I fortement glycosylée appartenant à la famille des protéines membranaires associées aux lysosomes (LAMP).
• Elle est principalement localisée sur les membranes des endosomes et des lysosomes, mais peut recycler vers la surface cellulaire, ce qui permet une présentation rapide sur la membrane plasmique des macrophages.
• La protéine joue un rôle critique dans la phagocytose : elle médie le métabolisme lysosomal intracellulaire des matériaux engloutis et participe aux interactions extracellulaires avec les pathogènes et d'autres cellules.
• CD68 se lie aux lectines ou sélectines spécifiques des tissus et des organes, ce qui facilite l'homing des sous-populations de macrophages vers des sites anatomiques précis et soutient l'adhésion et la migration des macrophages.
• Le recyclage rapide de CD68 des endosomes et lysosomes vers la membrane plasmique est supposé aider les macrophages à ramper sur les substrats ou autres cellules portant des sélectines.
• Bien que fortement exprimée dans les monocytes sanguins et les macrophages tissulaires, CD68 est également détectée dans les lymphocytes, les fibroblastes, les cellules endothéliales et de nombreuses lignées cellulaires tumorales, où elle peut favoriser la dissémination des cellules tumorales en se liant aux sélectines vasculaires.
• La protéine comporte plusieurs domaines de type mucine N-terminaux, une seule hélice transmembranaire et une courte queue cytoplasmique, avec une N- et O-glycosylation extensive et plusieurs ponts disulfures intramoléculaires.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique couvrant les résidus 100 à 200 de la CD68 humaine (NP_001242.2). La conservation de la séquence dans cette région explique probablement la réactivité croisée avec la souris et le rat.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire prédit du squelette non glycosylé est d'environ 37 kDa, mais les formes fortement glycosylées migrent souvent à des poids moléculaires apparents plus élevés (80 à 110 kDa). Il est recommandé d'utiliser un blocage approprié et des marqueurs de poids moléculaire adaptés.
• En immunofluorescence (IF-P) et en cytométrie en flux intracellulaire (FC), la perméabilisation est essentielle car CD68 réside principalement dans les compartiments endosomiaux et lysosomaux ; la coloration de surface nécessite de prendre en compte la dynamique de recyclage.
• Les performances en ELISA dépendent de l'accessibilité de l'épitope ; les effets de matrice et les conditions de revêtement doivent être optimisés, car la glycosylation importante peut masquer ou altérer la liaison de l'anticorps.
• Étant donné l'expression large dans les lignées de monocytes/macrophages, incluez des contrôles positifs pertinents (par exemple, cellules THP-1 ou RAW 264.7) et des contrôles isotypiques pour confirmer la spécificité dans votre système d'échantillon souhaité.

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