Anticorps monoclonal de lapin anti-CD59 pour WB, ELISA - P13987

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD59

• La glycoprotéine CD59, également appelée protectine, HRF20, MACIF ou MIRL, est une glycoprotéine de surface cellulaire ancrée par GPI, principalement exprimée sur les cellules humaines pour protéger contre la lyse médiée par le complément.
• Elle agit comme un inhibiteur puissant du complexe d'attaque membranaire (CAM) du complément, empêchant les dommages lors de l'activation du complément en bloquant les étapes finales de la formation des pores. Références associées : PMID:11882685 PMID:1698710 PMID:2475111
• D'un point de vue mécanistique, le CD59 se lie aux régions du bêta-hairpin des composants C8α et C8β du CAM en cours d'assemblage, formant un feuillet bêta intermoléculaire qui empêche l'incorporation de multiples molécules C9 nécessaires à la formation de pores osmolytiques. Références associées : PMID:11882685 PMID:1698710 PMID:36797260
• Une forme soluble du CD59, présente dans l'urine et d'autres fluides corporels, conserve son activité de liaison au complément mais présente une capacité inhibitrice du CAM très réduite par rapport à la forme liée à la membrane.
• Au niveau sous-cellulaire, le CD59 est ancré à la membrane cellulaire par un fragment GPI et peut également être trouvé sous formes sécrétées.
• La protéine contient des caractéristiques structurelles clés, notamment plusieurs ponts disulfures et sites de glycation, qui contribuent à sa stabilité et à sa fonction.
• Les variants génétiques du CD59 sont associés à l'anémie hémolytique héréditaire, ce qui met en évidence son rôle essentiel dans la protection des érythrocytes contre l'attaque du complément.
• L'épissage alternatif produit plusieurs isoformes du CD59, qui peuvent moduler sa fonction ou sa localisation.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène de cet anticorps est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 49 à 128 du CD59 humain, ciblant une région extracellulaire, ce qui le rend adapté pour détecter la forme native liée à la membrane.
• Pour le Western Blot, on attend une bande majeure à environ 14 kDa pour le squelette peptidique non glycosylé ; cependant, la glycosylation et l'ajout d'ancre GPI peuvent entraîner l'apparition d'espèces de poids moléculaire plus élevé. Il faut donc valider avec des contrôles positifs appropriés (par exemple, sérum humain ou membranes d'érythrocytes).
• Pour les applications ELISA, envisagez d'associer cet anticorps monoclonal à un autre clone ciblant un épitope distinct pour développer un immunoessai en sandwich sensible pour la quantification du CD59.
• Optimisez toujours la dilution de l'anticorps et les conditions expérimentales dans la matrice d'échantillon concernée pour garantir la spécificité et minimiser le bruit de fond.

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