Anticorps polyclonal de lapin anti-CD4 pour WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P01730

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD4

• Le CD4 est une glycoprotéine membranaire intégrale de 51 kDa également connue sous le nom d'antigène de surface des cellules T T4/Leu-3, appartenant à la superfamille des immunoglobulines. Il contient quatre domaines Ig-like extracellulaires (D1–D4), une seule hélice transmembranaire et une queue cytoplasmique qui interagit avec la kinase Src LCK.
• Dans les cellules T auxiliaires, le CD4 fonctionne comme un corécepteur pour les molécules de classe II du CMH. Il se lie simultanément au récepteur des cellules T (TCR) et au CMH de classe II sur les cellules présentatrices d'antigène, recrutant LCK pour phosphoryler les substrats du complexe TCR-CD3, ce qui initie des cascades de signalisation conduisant à l'activation des cellules T, à la production de lymphokines et à la prolifération.
• Le CD4 est critique pour le développement des thymocytes et la différenciation des cellules T auxiliaires. Il déclenche également la maturation des monocytes en macrophages, soulignant son rôle dans l'immunité innée et adaptative.
• Au-delà des cellules T, le CD4 est exprimé dans les macrophages, les cellules dendritiques et les cellules NK, où il module la différenciation, l'expression des cytokines et la migration cellulaire par des voies indépendantes du TCR/LCK.
• Le CD4 sert de récepteur principal pour le virus de l'immunodéficience humaine-1 (VIH-1) via son domaine D1, facilitant l'entrée virale. Il est également un récepteur pour l'herpèsvirus humain 7 (HHV-7). L'infection par le VIH-1 entraîne une régulation à la baisse du CD4 par la protéine virale Vpu. Références connexes : PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169, PMID:7909607
• La localisation subcellulaire est principalement à la membrane cellulaire, cohérente avec sa fonction de récepteur de surface. Une forme soluble peut être libérée lors de l'activation des cellules T.
• Il est fortement exprimé dans les cellules T auxiliaires mais également trouvé dans d'autres cellules immunitaires telles que les macrophages, les cellules dendritiques et les cellules NK. L'expression du CD4 est un marqueur définissant pour l'identification des cellules T auxiliaires.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation N-liée, les ponts disulfure dans les domaines Ig et la palmitoylation de la queue cytoplasmique, qui peuvent moduler la localisation des microdomaines membranaires et la signalisation.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre le domaine extracellulaire (aa 26‑200) du CD4 humain, englobant les sites de liaison du CMH de classe II et de la gp120 du VIH-1. Cette conception peut permettre la détection du CD4 pleine longueur dans les western blots dénaturants ainsi que des conformations natives en immunofluorescence et ELISA.
• Pour le western blot, une bande autour de 51 kDa est attendue dans des conditions réductrices. La glycosylation peut provoquer une augmentation du poids moléculaire apparent (55–60 kDa). Incluez des témoins positifs appropriés (par exemple, des lysats Jurkat ou de PBMC humains) et envisagez d'utiliser un agent réducteur.
• La réactivité croisée rapportée avec le CD4 de souris et de rat doit être vérifiée dans vos modèles expérimentaux spécifiques. L'alignement des séquences montre une identité d'environ 70 % dans la région extracellulaire ; la titration de l'anticorps primaire et une validation minutieuse sont recommandées.
• L'anticorps peut être utilisé dans des formats d'immunofluorescence indirecte (IF/ICC) et ELISA. Assurez-vous d'utiliser des protocoles de fixation et de perméabilisation appropriés pour l'IF ; pour le marquage de surface cellulaire, évitez la perméabilisation. Validez sur le type de cellule ou le tissu pertinent.
• Lors d'une utilisation pour des études fonctionnelles (par exemple, le blocage de la liaison du VIH‑1), notez que la nature polyclonale peut donner des résultats variables ; les formats monoclonaux peuvent être préférés pour un blocage épitope-spécifique cohérent.

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