Anticorps monoclonal de lapin anti-CD16b pour WB, FC, ELISA - O75015

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD16b

• Le CD16b (FcγRIIIB) est un récepteur de faible affinité pour la région Fc des immunoglobulines gamma, codé par le gène FCGR3B. C'est une glycoprotéine ancrée par un glycosylphosphatidylinositol (GPI) sans domaine transmembranaire, ce qui le distingue du FcγRIIIA.
• Le récepteur se lie aux IgG complexes ou agrégées et aux IgG monomères, mais contrairement au FcγRIIIA, il ne médie pas la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) ou la phagocytose, servant probablement de récepteur leurre qui piège les complexes immuns dans la circulation périphérique sans activer les neutrophiles.
• Le CD16b est exprimé spécifiquement par les leucocytes polymorphonucléaires (neutrophiles) et par les éosinophiles stimulés, soulignant son rôle dans la surveillance immunitaire innée sur les granulocytes.
• Au niveau subcellulaire, le CD16b se trouve sur la membrane cellulaire et peut être libéré sous forme sécrétée, médiée par le clivage de son ancre GPI.
• La protéine contient deux domaines de type immunoglobuline et est fortement glycosylée ; un poids moléculaire prédit d'environ 26 kDa (protéine centrale 26 243 Da) est souvent observé sous forme de bande diffuse en raison de la glycosylation.
• Les caractéristiques structurelles clés incluent un peptide signal N-terminal (aa 1-18), le domaine extracellulaire de liaison aux IgG (aa 20-208, utilisé comme immunogène) et un site d'attachement de l'ancre GPI C-terminal. Les multiples alias (CD16, FCG3, FCGR3, FCR-10, FCRIII) reflètent la nomenclature historique.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre l'intégralité du domaine extracellulaire de liaison aux IgG (aa 20-208) du CD16b humain, ce qui le rend bien adapté à la détection des protéines natives et dénaturées dans diverses applications.
• Pour le Western blot (WB), une bande autour de 26 kDa est attendue dans des conditions réductrices ; un étalement ou une bande diffuse peuvent survenir en raison de la glycosylation — validez avec des témoins positifs appropriés (par exemple, des lysats de neutrophiles) et envisagez une déglycosylation si une bande nette est requise.
• En cytométrie en flux (FC), utilisez un anticorps secondaire conjugué à un fluorophore compatible pour la détection du CD16b de surface sur des neutrophiles vivants non fixés ; évitez les méthodes de fixation qui pourraient altérer l'intégrité des protéines ancrées par GPI.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection ; l'appariement avec un clone anti-CD16b non compétitif est recommandé pour les formats sandwich, et les conditions du test doivent être optimisées avec une protéine CD16b recombinante ou purifiée.
• La réactivité croisée est limitée à l'humain ; aucune réactivité avec le CD16b de souris ou de rat n'est attendue, choisissez donc un système modèle approprié ou validez avec des échantillons humains.

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