Anticorps monoclonal de lapin anti-CD146/MCAM pour WB, IHC-P, IF/ICC - P43121

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD146/MCAM

• CD146/MCAM (également connu sous les noms MUC18, MelCAM et HEMCAM) est une glycoprotéine de surface cellulaire codée par le gène MCAM, appartenant à la superfamille des immunoglobulines de molécules d’adhésion.
• Il intervient dans l’adhésion cellule-cellule indépendante du calcium et joue un rôle essentiel dans le maintien de l’intégrité de la monocouche endothéliale au niveau des jonctions intercellulaires.
• Son expression à la surface des cellules de mélanome facilite les interactions avec l’endothélium vasculaire, favorisant la dissémination hématogène et les métastases.
• Au cours du développement embryonnaire, CD146/MCAM peut agir comme une molécule d’adhésion dans les cellules de la crête neurale en migration.
• La liaison au ligand déclenche la phosphorylation sur tyrosine de FYN et de PTK2/FAK1, ainsi qu’une élévation transitoire du calcium intracellulaire, ce qui indique un rôle dans la transduction des signaux.
• Dans les tissus adultes normaux, l’expression de CD146/MCAM est largement limitée aux cellules musculaires lisses vasculaires et aux cellules endothéliales.
• La protéine est fortement exprimée dans les mélanomes primitifs avancés et métastatiques, mais rarement détectée dans les nævus bénins, ce qui est corrélé à la progression tumorale.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la phosphorylation et la glycosylation liée à l’azote, et la protéine contient des répétitions de type immunoglobuline reliées par des ponts disulfure ainsi qu’un domaine transmembranaire.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond au domaine extracellulaire (aa 24-559) de CD146/MCAM humain, ce qui permet de prévoir la détection de la protéine complète ainsi que de toute forme soluble libérée dans les échantillons appropriés.
• Pour le Western blot, la bande attendue est d’environ 72 kDa ; toutefois, en raison de la glycosylation, le poids moléculaire observé peut être supérieur. Il est recommandé d’utiliser des conditions dénaturantes et réductrices.
• En immunofluorescence (IF/ICC), la localisation membranaire devrait être prédominante ; inclure une perméabilisation appropriée si l’accès aux épitopes intracellulaires est nécessaire, bien que le ciblage du domaine extracellulaire puisse permettre une coloration sur cellules vivantes.
• Pour l’immunohistochimie (IHC-P), des méthodes de récupération antigénique et une optimisation peuvent être nécessaires ; une expression est attendue dans l’endothélium vasculaire et les tissus de mélanome.
• Bien que l’ELISA soit indiqué comme application, il convient de l’associer à un anticorps de capture/détection approprié ; les utilisateurs finaux doivent valider l’anticorps dans le format spécifique de leur essai.
• La réactivité croisée a été validée pour l’être humain ; pour les autres espèces, effectuer une analyse d’homologie de séquence et une vérification expérimentale.

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