Anticorps monoclonal de lapin anti-Cas9 pour WB, ELISA - Q99ZW2

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Cas9

• Cas9 (endonucléase associée au CRISPR Cas9/Csn1) est une endonucléase ADN guidée par ARN qui sert de protéine effectrice du système immunitaire adaptatif CRISPR-Cas de type II chez Streptococcus pyogenes.
  Références associées : PMID:21455174
• Dans la voie d'interférence CRISPR, Cas9 forme un complexe avec un ARN CRISPR (crRNA) et un ARN trans-activateur de crRNA (tracrRNA). Ce complexe guidé par ARN double reconnaît et clive les cibles d'ADN double brin complémentaires à la séquence espaceur du crRNA.
• La reconnaissance et le clivage de la cible nécessitent une courte séquence motif adjacent au proto-espaceur (PAM) (5’-NGG-3’ pour SpCas9) immédiatement en aval du site cible. La reconnaissance du PAM est essentielle pour l'activité catalytique et aide à distinguer l'ADN soi du non-soi.
  Références associées : PMID:24476820
• Au-delà du clivage de l'ADN, Cas9 participe également à la maturation des crRNA. Avec le tracrRNA et la ribonucléase III de l'hôte, il stabilise le duplex pré-crRNA:tracrRNA pour un traitement correct, bien que Cas9 lui-même n'ait aucun rôle catalytique dans le clivage de l'ARN.
  Références associées : PMID:24270795
• Cas9 est une protéine multi-domaine possédant des activités de liaison à l'ADN, d'endonucléase et d'exonucléase. Elle dépend d'ions métalliques divalents tels que le magnésium ou le manganèse pour ses fonctions nucléolytiques.
• Caractérisée structurellement à haute résolution, Cas9 présente une flexibilité conformationnelle qui lui permet de jouer ses rôles dans la liaison à l'ARN, le déroulement de l'ADN et le clivage coordonné par ses deux domaines nucléases (RuvC et HNH).
• Le poids moléculaire natif de Cas9 est d'environ 158 kDa, cohérent avec son architecture multi-domaine importante.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène comprend les acides aminés 450 à 730 de Cas9 de Streptococcus pyogenes, une région qui comprend des parties du domaine nucléase RuvC. Considérez que l'anticorps peut reconnaître à la fois la protéine Cas9 native et dénaturée.
• Pour le western blot, le poids moléculaire prédit de Cas9 pleine longueur est d'environ 158 kDa ; validez la réactivité dans le système d'échantillon pertinent (par exemple, des lysats de S. pyogenes ou des lignées cellulaires ingénierées exprimant SpCas9).
• Lors du développement d'un ELISA, évaluez les performances de l'anticorps contre la protéine Cas9 recombinante ou des extraits cellulaires. La réactivité croisée indiquée (Humain, Autre) suggère un potentiel pour des applications impliquant des lignées cellulaires humaines ou des tissus exprimant Cas9 exogène.

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