Anticorps monoclonal anti-calréticuline [Validé par KO] pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P27797

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la calréticuline

• La calréticuline (CALR) est une protéine de liaison au calcium de 417 acides aminés, également connue sous les noms de CRP55, Calréguline, ERp60, HACBP et grp60, codée chez l’humain par le gène CALR.
• Elle fonctionne comme une chaperonne lectinique dans le réticulum endoplasmique (RE), interagissant transitoirement avec les glycoprotéines monoglucosylées afin de favoriser leur repliement, leur assemblage oligomérique et le contrôle qualité par l’intermédiaire du cycle calréticuline/calnexine (PubMed:7876246). Références associées : PMID:7876246
• La calréticuline assure également l’export nucléaire de NR3C1 (récepteur des glucocorticoïdes) en se liant à son domaine de liaison à l’ADN, influençant ainsi la régulation transcriptionnelle (PubMed:11149926). Références associées : PMID:11149926
• Elle est principalement localisée dans la lumière du RE, mais peut également se trouver dans le cytosol, être sécrétée dans l’espace extracellulaire, être associée à la surface cellulaire et se trouver dans des vésicules cytoplasmiques telles que les granules de sécrétion et les lysosomes.
• La calréticuline joue un rôle dans l’homéostasie du calcium et participe à la régulation de l’expression des gènes maternels ; elle pourrait être impliquée dans la maturation des ovocytes et dans le blocage de la polyspermie lors de l’exocytose des granules corticaux (par analogie).
• La protéine contient une séquence signal, trois répétitions de la famille de la calréticuline et subit des modifications post-traductionnelles, notamment l’acétylation, l’hydroxylation, la glycosylation et la formation de ponts disulfure, avec des propriétés de liaison au zinc et au calcium.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L’immunogène correspond aux acides aminés 18 à 203, englobant le domaine N-terminal et une partie du domaine P, connus pour être hautement conservés. Cette conception devrait produire un anticorps reconnaissant les formes natives et dénaturées, adapté à de multiples applications.
• Pour le Western blot (WB), une bande principale d’environ 47 kDa est attendue ; il est recommandé d’utiliser des conditions réductrices et de valider le résultat dans le lysat cellulaire ou tissulaire pertinent. Titrer les dilutions de l’anticorps afin d’obtenir un rapport signal/bruit optimal.
• En immunohistochimie (IHC-P) et en immunofluorescence (IF/ICC), les étapes de fixation et de perméabilisation peuvent influencer la coloration de la calréticuline localisée dans le RE ; une récupération antigénique avec un tampon citrate (pH 6,0) et un blocage avec du sérum sont couramment utilisés.
• Pour l’ELISA, cet anticorps monoclonal peut servir de réactif de capture ou de détection ; pour les dosages quantitatifs, il est recommandé de l’associer à un anticorps apparié ou à un calibrateur.
• Le statut de validation par KO indique que l’anticorps reconnaît spécifiquement la calréticuline, le signal étant aboli dans les modèles knockout ; inclure toujours les contrôles appropriés dans les dispositifs expérimentaux.

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