Anticorps monoclonal de lapin anti-CAD pour WB, IF/ICC, ELISA - P27708

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CAD

• CAD est une grande enzyme multifonctionnelle qui code les trois premières activités de la voie de biosynthèse de novo des pyrimidines : la carbamoyl phosphate synthétase (CPSase), l'aspartate transcarbamylase (ATCase) et la dihydroorotase (DHOase).
• L'activité CPSase implique un domaine d'amidotransférase dépendante de la glutamine (GATase) qui génère de l'ammoniac, qui est ensuite utilisé par le domaine de la synthétase pour produire du phosphate de carbamoyle à partir d'ATP et de bicarbonate.
• Le phosphate de carbamoyle produit est dirigé vers le site actif de l'ATCase, qui catalyse la formation de carbamoyl-L-aspartate à partir de L-aspartate.
• Enfin, le domaine DHOase cyclise l'aspartate de carbamoyle pour former du dihydroorotate, le précurseur de la synthèse d'UMP.
• CAD est localisé à la fois dans le cytoplasme et dans le noyau.
• Les modifications post-traductionnelles de CAD comprennent l'acétylation et la phosphorylation, qui régulent son activité et le flux de la voie métabolique.
• Les mutations du gène CAD sont associées à des maladies congénitales de la glycosylation (CDG1Z) et à l'encéphalopathie développementale et épileptique (DEE50, EIEE50).
• La protéine a un poids moléculaire d'environ 243 kDa et contient plusieurs domaines avec des sites de liaison pour l'ATP, les ions métalliques (magnésium, manganèse, zinc) et les nucléotides.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique correspondant à la région N-terminale (aa 1–100) du CAD humain, ciblant probablement le domaine GATase. Vérifiez la spécificité dans les modèles cellulaires concernés.
• Pour la détection par Western Blot de la protéine de 243 kDa, utilisez un gel de polyacrylamide à faible pourcentage (par exemple 6 à 8 %) et des temps de transfert prolongés pour garantir un transfert efficace.
• En IF/ICC, prévoyez une fixation au PFA à 4 % et une perméabilisation au Triton X-100 à 0,1 % pour détecter à la fois les pools cytoplasmique et nucléaire.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé dans des formats directs ou sandwich ; incluez le peptide immunogène comme contrôle positif.
• L'expression endogène de CAD varie selon les types cellulaires ; validez l'anticorps dans votre système expérimental, par exemple sur des cellules HeLa ou HEK293.
• La réactivité croisée avec des espèces autres que l'humain n'a pas été déterminée ; réalisez un alignement de séquences si vous testez des échantillons non humains.

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