Anticorps polyclonal de lapin anti-ATP7B pour WB, IHC-P, ELISA - P35670

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'ATP7B

• Identité protéique : L'ATP7B, également appelé ATPase 2 transporteuse de cuivre ou protéine associée à la maladie de Wilson, est une ATPase de type P transporteuse de cuivre codée par le gène ATP7B (GeneID 540). Il appartient à la sous-famille P1B des ATPases transportant les métaux lourds.
• Fonction principale : L'ATP7B médie l'exportation du cuivre dépendante de l'ATP hors des cellules, un processus essentiel au maintien de l'homéostasie du cuivre. Dans les hépatocytes, il facilite l'efflux du cuivre vers la bile, notamment lorsque les concentrations intracellulaires de cuivre sont élevées, empêchant ainsi son accumulation toxique.
• Localisation subcellulaire : Dans des conditions basales de cuivre, l'ATP7B réside majoritairement dans la membrane du réseau trans-Golgien (RTG), où il fournit du cuivre aux cuproenzymes. En cas de surcharge en cuivre, il se transloque vers les vésicules cytoplasmiques et la membrane plasmique, ainsi que vers les endosomes tardifs et les mitochondries, pour exporter l'excès de cuivre.
• Expression tissulaire : L'ATP7B est le plus abondant dans le foie et les reins, avec une expression plus faible dans le cerveau. Une isoforme spécifique du cerveau (isoforme 2) et une forme clivée par protéolyse de 140 kDa (WND/140 kDa) sont également détectées.
• Modifications post-traductionnelles et régulation : La protéine subit une phosphorylation et un épissage alternatif, et un événement de décalage du cadre de lecture ribosomique peut générer des variants supplémentaires. Ces modifications influencent son trafic et son activité catalytique.
• Pertinence clinique : Les mutations de l'ATP7B causent la maladie de Wilson (MW), une maladie autosomique récessive caractérisée par une accumulation de cuivre dans le foie et le cerveau, entraînant des symptômes hépatiques et neurologiques. L'anticorps cible une région proche de l'extrémité C-terminale (aa 1251-1351), qui permet de détecter les formes entière et clivée de la protéine.

Conseils expérimentaux et techniques

• Conception de l'immunogène : L'immunogène couvre les acides aminés 1251–1351 de la région C-terminale, qui est très conservée entre les espèces (ce qui explique la réactivité croisée avec la souris et le rat). D'après les modèles de topologie, cette région est prédite comme cytoplasmique, ce qui permet probablement d'obtenir des anticorps reconnaissant à la fois la forme entière et les fragments C-terminaux.
• Western blotting : Le poids moléculaire prédit de l'ATP7B est d'environ 157 kDa. Utilisez un gel à faible pourcentage (par exemple 6–8%) et assurez des conditions de transfert adéquates (par exemple transfert humide avec réduction de méthanol) pour les protéines de haut poids moléculaire. L'anticorps peut également détecter la forme clivée de 140 kDa (WND/140) dans le foie ou des lignées cellulaires.
• IHC-P : Optimisez la récupération d'antigène (par exemple tampon citrate ou EDTA médié par la chaleur) et incluez des contrôles appropriés (par exemple tissu hépatique comme contrôle positif, contrôle isotypique). La coloration dans les hépatocytes doit se localiser au niveau du RTG et montrer une redistribution après un stress au cuivre.
• ELISA : L'immunogène recombinant peut servir d'étalon pour les dosages quantitatifs. Validez la linéarité et la sensibilité en utilisant des lysats chargés en cuivre ou surexprimant l'ATP7B.

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