Anticorps Monoclonal Anti-ATG5 pour WB, IF-P, IHC-P, IP, ELISA - Q9H1Y0

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de l'ATG5

• La protéine d'autophagie 5 (ATG5), également connue sous le nom d'APG5-like, ASP ou hAPG5, est une protéine clé liée à l'autophagie codée par le gène ATG5 (ID de gène : 9474) chez l'homme.
• L'ATG5 est essentielle pour la formation des vésicules autophagiques. Elle se conjugue à l'ATG12 via un système semblable à l'ubiquitine impliquant l'ATG7 (type E1) et l'ATG10 (type E2). Le conjugué ATG12-ATG5 agit comme une enzyme de type E3 pour la lipidation des protéines de la famille ATG8, facilitant leur association avec les membranes vésiculaires.
• L'ATG5 joue un rôle critique dans le contrôle de la qualité mitochondriale après des dommages oxydatifs, contribuant à la longévité cellulaire, et est impliquée dans le développement des lymphocytes, où elle est essentielle pour la survie et la prolifération des cellules B et T.
• La protéine est nécessaire pour un traitement et une présentation optimaux des antigènes via le CMH II, le maintien de la morphologie axonale, la différenciation normale des adipocytes, et favorise la ciliogenèse primaire en éliminant l'OFD1 des satellites centriolaires et en dégradant l'IFT20 par autophagie.
• L'ATG5 peut également fonctionner dans l'apoptose, possiblement au sein du cytosquelette modifié. Son expression est régulée à la hausse dans les cellules apoptotiques en aval de l'activité des caspases, et elle est cruciale pour la mort cellulaire autophagique induite par l'IFN-gamma en interagissant avec FADD.
• (Infection microbienne) L'ATG5 peut agir comme un facteur proviral : elle régule négativement la réponse immunitaire antivirale innate en entravant la production d'IFN de type I lors d'une infection par VSV, et est nécessaire pour l'initiation de la traduction et de la réplication de l'ARN du virus de l'hépatite C. Références connexes : PMID:17709747 PMID:19666601
• Au niveau subcellulaire, l'ATG5 se localise dans le cytoplasme et la membrane de la structure pré-autophagique. Elle est exprimée de manière ubiquitaire au niveau de l'ARNm, mais la protéine est exprimée de manière extrêmement élevée dans les cellules apoptotiques.
• Les modifications post-traductionnelles clés incluent l'acétylation et la formation d'une liaison isopeptidique avec l'ATG12. La protéine est associée à des mots-clés tels que l'autophagie, l'apoptose, l'interaction hôte-virus, l'immunité et la neurodégénérescence.

Guidance Expérimentale et Conseils Techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique situé dans les acides aminés 1-100 de l'ATG5 humaine. Validez la spécificité en utilisant des lignées cellulaires avec knockout d'ATG5 ou par siRNA knockdown.
• Pour la détection par Western blot (WB), une bande autour de 32-35 kDa (monomère ATG5 ; le conjugué ATG12-ATG5 migre plus haut, vers ~55 kDa) est attendue. Envisagez de tester sur des échantillons induisant l'autophagie (par exemple, traités par privation de nutriments ou rapamycine) pour amplifier le signal.
• En immunofluorescence (IF) et immunohistochimie (IHC), l'ATG5 présente une coloration ponctuelle cytoplasmique qui s'accumule lors de l'induction de l'autophagie ; optimisez la fixation et la perméabilisation pour préserver les structures des autophagosomes.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), l'anticorps peut capturer à la fois l'ATG5 libre et le conjugué ATG12-ATG5 ; assurez-vous de conditions de lyse appropriées pour détecter les interactions protéine-protéine.
• Une réactivité croisée avec la souris et le rat est attendue sur la base de l'homologie de séquence ; néanmoins, vérifiez les performances dans l'espèce et le contexte tissulaire pertinents.

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