Anticorps polyclonal de lapin anti-ARF5 pour WB, ELISA - P84085

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'ARF5

• L'ARF5 est un membre de la famille des facteurs d'ADP-ribosylation (ARF) de petites GTPases, qui jouent des rôles essentiels dans le trafic vésiculaire intracellulaire et la structure des organites.
• Elle fonctionne comme une protéine liant le GTP qui contribue au bourgeonnement et au décoatinage des vésicules à l'appareil de Golgi, médiant le transport des protéines entre le réticulum endoplasmique et l'appareil de Golgi.
• L'ARF5 régule l'activité de mTORC1 en favorisant le recrutement de mTORC1 vers les replis de la membrane plasmique, facilitant ainsi son activation via la voie de signalisation PI3K/Akt. Références connexes : PMID:36735494
• Elle agit comme une intervenante précoce en cas de dommage lysosomal et participe aux voies de contrôle de qualité des lysosomes, soulignant son rôle dans le maintien de l'homéostasie cellulaire. Références connexes : PMID:41293316
• Lors d'une infection microbienne, l'ARF5 sert d'activateur allostérique de la sous-unité catalytique de la toxine cholérique, une ADP-ribosyltransférase, indiquant son implication dans les interactions hôte-pathogène.
• La protéine se localise dans plusieurs compartiments cellulaires, notamment la membrane cellulaire, l'appareil de Golgi, la membrane du réseau trans-Golgien, le cytoplasme (région périnucléaire) et la membrane lysosomale.
• L'ARF5 est caractérisée par des modifications post-traductionnelles telles que la N-myristoylation, qui l'ancre aux membranes, et elle contient des domaines de liaison au GTP conservés essentiels à ses fonctions régulatrices.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène correspond à la région N-terminale (acides aminés 1-180) de l'ARF5 humaine. Cette région comprend le domaine de liaison au GTP conservé et est susceptible de détecter l'ARF5 pleine longueur. Envisagez d'utiliser un lysat de contrôle positif de HeLa, HEK293 ou d'autres lignées cellulaires humaines exprimant l'ARF5 pour la validation par Western blot.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit de l'ARF5 est d'environ 21 kDa. Utilisez des conditions SDS-PAGE réductrices et un tampon de blocage standard. Optimisez empiriquement la dilution de l'anticorps primaire entre 1:500 et 1:2000, et incluez un anticorps secondaire approprié à l'espèce.
• L'anticorps convient aux applications ELISA. Pour un ELISA direct ou en sandwich, titrez l'anticorps contre la protéine recombinante utilisée comme immunogène ou contre des lysats cellulaires pour déterminer les concentrations optimales d'enrobage et de détection.
• Une réactivité croisée est signalée avec l'ARF5 humaine, de souris et de rat. Lorsque vous travaillez avec des échantillons de souris ou de rat, validez l'anticorps dans votre système modèle spécifique, car les modifications post-traductionnelles ou les niveaux d'expression des protéines peuvent varier.

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