Anticorps monoclonal Anti-ARF5 pour WB, IF/ICC, ELISA - P84085

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'ARF5

• Le facteur 5 d'ADP-ribosylation (ARF5) est une petite protéine liant le GTP qui alterne entre un état actif lié au GTP et un état inactif lié au GDP, agissant comme interrupteur moléculaire dans le trafic intracellulaire.
• ARF5 joue un rôle clé dans le trafic protéique, contribuant au bourgeonnement et au déshabillage des vésicules au niveau de l'appareil de Golgi.
• Il régule l'activité de mTORC1 en favorisant le recrutement du complexe mTORC1 vers les ondulations de la membrane plasmique, facilitant son activation via la voie de signalisation PI3K/Akt. Références associées : PMID:36735494
• ARF5 agit comme répondeur précoce aux dommages lysosomaux et participe aux voies de contrôle de la qualité lysosomale. Références associées : PMID:41293316
• Au cours des infections microbiennes, ARF5 fonctionne comme activateur allostérique de la sous-unité catalytique de la toxine du choléra, une ADP-ribosyltransférase.
• ARF5 est localisé dans plusieurs compartiments cellulaires, notamment l'appareil de Golgi (membrane du réseau trans-golgien), la membrane cellulaire, le cytoplasme (région périnucléaire) et la membrane lysosomale, ce qui reflète ses rôles dynamiques dans le trafic.
• Il s'agit d'une lipoprotéine myristoylée, avec un groupement myristoyle attaché à son extrémité N-terminale, qui facilite probablement son association aux membranes.
• La masse moléculaire calculée de la protéine est d'environ 20,5 kDa et elle appartient à la famille ARF des petites GTPases.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 81 à 180 de l'ARF5 humain, une séquence conservée chez l'homme, la souris et le rat ; l'anticorps peut donc détecter l'ARF5 chez ces espèces, mais la réactivité croisée doit être validée dans votre système expérimental.
• Pour le Western blot (WB), la bande d'ARF5 est prévue à ~21 kDa ; nous recommandons d'utiliser des contrôles positifs appropriés (par exemple des lysats de cellules HeLa ou HEK293) et de confirmer la spécificité de la bande par validation ARNsi ou knock-out.
• En immunofluorescence (IF/ICC), ARF5 se localise au Golgi et dans les vésicules cytoplasmiques ; les conditions de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées pour les marqueurs golgiens, et un co-marquage avec des marqueurs d'organites est recommandé.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de détection ou de capture ; l'association avec une paire d'anticorps anti-ARF5 adaptée peut être nécessaire pour les configurations d'ELISA sandwich.
• ARF5 étant une protéine associée à la membrane et myristoylée, des tampons d'extraction contenant des détergents doux peuvent améliorer la solubilité sans perturber la reconnaissance de l'épitope.

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