Anticorps polyclonal de lapin anti-APTX pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q7Z2E3

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'APTX

• L'aprataxine (APTX), également connue sous le nom de protéine de type domaine triade histidine à domaine associé à la tête de fourche (FHA-HIT), est une protéine de liaison à l'ADN impliquée dans la réparation des cassures simple brin de l'ADN, la réparation des cassures double brin et la réparation par excision de bases (PubMed:15044383, PubMed:15380105, PubMed:16964241). Elle résout les intermédiaires de ligature abortive de l'ADN en catalysant la libération de groupes adénylate des extrémités 5'-phosphate, générant des extrémités 5'-phosphate qui peuvent être efficacement reconnectées (PubMed:16964241, PubMed:17276982, PubMed:24362567). Références associées : PMID:15044383, PMID:15380105, PMID:16964241, PMID:17276982, PMID:24362567

• L'APTX hydrolyse également l'adénosine 5'-monophosphoramidate (AMP-NH(2)) et le diadénosine tétraphosphate (AppppA), bien qu'avec une activité catalytique plus faible (PubMed:16547001). Elle présente une activité spécifique plus élevée avec l'adénosine liée en 5' (AppDNA) par rapport aux adduits d'ADN à guanosine ou inosine liés en 3' (Par similarité). Références associées : PMID:16547001

• La protéine se localise principalement dans le noyau, y compris le nucléoplasme et le nucléole, mais elle est également détectée dans le cytoplasme.

• L'APTX contient un doigt de zinc et un domaine FHA, nécessitant la liaison à des ions métalliques pour son activité. Elle est soumise à phosphorylation (mot-clé Phosphoprotéine).

• L'isoforme 1 est fortement exprimée dans le cortex cérébral et le cervelet par rapport à l'isoforme 2. L'APTX est largement exprimée dans des tissus comme le foie, le rein, les ganglions lymphatiques, le muscle squelettique, les fibroblastes, les lymphocytes et le pancréas (PubMed:14755728, PubMed:11586299, PubMed:11586300, PubMed:15276230). Références associées : PMID:14755728, PMID:11586299, PMID:11586300, PMID:15276230

• Les mutations de l'APTX causent l'ataxie avec apraxie oculomotrice de type 1 (AOA1), une maladie neurodégénérative, ce qui met en évidence son rôle essentiel dans la réparation de l'ADN neuronale.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (protéine recombinante couvrant les acides aminés 93-342 de l'APTX humain) couvre le domaine catalytique HIT ; par conséquent, l'anticorps polyclonal obtenu peut reconnaître les deux isoformes. Vérifiez la détection des isoformes dans votre système d'échantillon.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire prédit est de 41 kDa, mais les modifications post-traductionnelles peuvent entraîner de légers décalages. Utilisez des contrôles positifs appropriés (par exemple, lysats de HeLa, HEK293) et validez avec un knockdown par ARNsi si possible.
• En immunofluorescence (IF/ICC), attendez un marquage nucléaire avec un possible enrichissement nucléolaire. Co-marquez avec un marqueur nucléolaire (par exemple, la fibrillarine) pour confirmer la localisation.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), l'anticorps peut capturer l'APTX et ses protéines interactrices impliquées dans la réparation de l'ADN. Optimisez les conditions de tampon de lyse (par exemple, concentration en sel, détergent) pour préserver les complexes protéiques.
• Les applications ELISA peuvent être développées en utilisant la protéine ou le peptide APTX recombiné comme standard. Titrez l'anticorps pour obtenir un rapport signal/bruit optimal.
• Cet anticorps est validé pour la réactivité humaine ; la réactivité croisée avec d'autres espèces n'a pas été déterminée. Si vous utilisez des échantillons non humains, un alignement de séquence de la région de l'immunogène est recommandé.

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