Anticorps polyclonal de lapin anti-APP (validé par KO) pour WB, ELISA - P05067

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'APP

• La protéine précurseur de l'amyloïde-bêta (APP) est une glycoprotéine transmembranaire existant sous plusieurs isoformes générées par épissage alternatif ; l'isoforme neuronale majoritaire est APP695, tandis que APP751 et APP770 sont exprimées dans les cellules non neuronales, et l'appican est exprimée dans les astrocytes.
• L'APP agit comme récepteur de surface cellulaire impliqué dans la croissance des neurites, l'adhésion neuronale et l'axonogenèse ; les interactions entre molécules d'APP sur des cellules adjacentes favorisent la synaptogenèse.
  Références associées : PMID:25122912
• L'APP sert de récepteur membranaire pour la kinésine I, médiant le transport axonal de la beta-secrétase et de la préséniline 1, processus essentiel pour l'acheminement du cargaison vers les synapses.
  Références associées : PMID:17062754, PMID:23011729
• Les peptides d'amyloïde-bêta, issus de la protéolyse de l'APP, sont des chélateurs lipophiles de métaux qui se lient au cuivre, au zinc et au fer, et peuvent réduire le Cu²⁺ et le Fe³⁺ ; ils favorisent l'agrégation de tau et la phosphorylation médiée par TPK II, et leur interaction avec la protéine HADH2 surexprimée contribue au stress oxydatif.
• Les peptides Gamma-CTF et les fragments clivés par la caspase, comme C31, sont des activateurs puissants de l'apoptose neuronale.
• Certaines isoformes de l'APP contiennent un domaine inhibiteur de sérine protéase de type Kunitz (BPTI), ce qui leur confère une activité inhibitrice de protéases, et l'APP subit de nombreuses modifications post-traductionnelles : N- et O-glycosylation, phosphorylation et sulfatation.
• Au niveau sous-cellulaire, l'APP est localisée sur la membrane cellulaire, dans les puits recouverts de clathrine, les endosomes précoces, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, les vésicules cytoplasmiques, et elle est également sécrétée ; elle peut être détectée dans le noyau et le cytoplasme.
• L'APP est exprimée dans le cerveau et le liquide céphalo-rachidien, avec des niveaux les plus élevés dans le lobe frontal du cortex ; on la trouve également dans le rein, le cœur, la rate et le plasma. L'isoforme APP695 prédomine dans les neurones, tandis que APP751 et APP770 sont exprimées dans les cellules non neuronales (PubMed:2649245).
  Références associées : PMID:2649245

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Compte tenu de la conception de l'immunogène (acides aminés 1-100 de l'Aβ42 humain), on peut attendre que l'anticorps reconnaisse à la fois l'APP entière (~87 kDa) et les fragments protéolytiques contenant l'amyloïde-bêta, tels que CTF99, CTF83 et les peptides Aβ, en Western blot. La validation sur des échantillons de type sauvage versus des échantillons knock-out pour APP permet de confirmer la spécificité, conformément au statut validé par KO de cet anticorps.
• Pour l'ELISA, il est recommandé d'associer cet anticorps polyclonal à un anticorps monoclonal reconnaissant un épitope différent de l'APP pour développer un test sandwich sensible. L'optimisation des conditions de revêtement et de détection est conseillée.
• Bien que l'anticorps ait été obtenu contre l'APP humaine et présente une réaction croisée avec les échantillons humains, les utilisateurs travaillant avec d'autres espèces doivent réaliser une validation adaptée en raison d'une possible divergence de séquence.
• L'anticorps est expédié dans des sacs de glace pour maintenir sa stabilité ; à la réception, aliquoter et conserver à -20°C ou -80°C pour éviter des cycles répétés de congélation-décongélation.

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