Anticorps monoclonal anti-APOE pour WB, IF/ICC, ELISA - P02649

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’APOE

• L’APOE (apolipoprotéine E) est un composant essentiel des lipoprotéines plasmatiques. Elle intervient principalement dans le transport des lipides entre les organes, médié par les lipoprotéines, via le plasma et les liquides interstitiels, et participe à la production, à la conversion et à l’élimination des particules de chylomicrons, de VLDL, d’IDL et de HDL (PubMed:14754908, PubMed:1911868, PubMed:6860692, PubMed:1917954). Références associées : PMID:14754908, PMID:1911868, PMID:6860692, PMID:1917954

• L’APOE se lie à des récepteurs cellulaires, notamment LDLR, LRP1, LRP2, LRP8 et VLDLR, afin de permettre l’absorption des particules de lipoprotéines contenant de l’APOE. Elle possède également une activité de liaison à l’héparine qui favorise la capture à la surface cellulaire par l’intermédiaire des protéoglycanes à héparane sulfate (PubMed:12950167, PubMed:1530612, PubMed:1917954, PubMed:23676495, PubMed:7635945, PubMed:9395455). Références associées : PMID:12950167, PMID:1530612, PMID:1917954, PMID:23676495, PMID:7635945, PMID:9395455

• Elle joue un rôle essentiel dans le transport inverse du cholestérol en participant à la biogenèse des HDL médiée par ABCA1 et en favorisant l’absorption hépatique des HDL, contribuant ainsi à l’homéostasie du cholestérol (PubMed:14754908, PubMed:23620513, PubMed:9395455). Références associées : PMID:14754908, PMID:23620513, PMID:9395455

• Dans le système nerveux central, l’APOE est importante pour le transport des lipides, la régulation de la survie et de la croissance des neurones, et pourrait influencer la pathogenèse de la maladie d’Alzheimer par la régulation transcriptionnelle de l’APP dépendante des récepteurs (PubMed:25173806, PubMed:8939961, PubMed:28111074). Références associées : PMID:25173806, PMID:8939961, PMID:28111074

• L’APOE est sécrétée et se trouve dans l’espace extracellulaire, la matrice extracellulaire et les corps multivésiculaires endosomaux. Elle est principalement produite par les hépatocytes du foie, mais également dans le cerveau (astrocytes, neurones), la glande surrénale, les reins, la rate et le tissu adipeux (PubMed:25173806, PubMed:10027417, PubMed:3115992). Références associées : PMID:25173806, PMID:10027417, PMID:3115992

• L’APOE participe aux réponses immunitaires innées et adaptatives, en se liant au récepteur des cellules immunitaires LILRB4 et en contrôlant la survie des cellules suppressives dérivées de la lignée myéloïde. Elle participe également à l’infection par le VHC en interagissant avec la glycoprotéine d’enveloppe virale E2 (PubMed:30333625, PubMed:25122793, PubMed:29695434). Références associées : PMID:30333625, PMID:25122793, PMID:29695434

• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation, la phosphorylation et l’oxydation. L’APOE est sensible à la glycation, et ses variants sont associés à l’hyperlipidémie et à la maladie d’Alzheimer.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène est une protéine recombinante couvrant les acides aminés 19-317 de l’APOE humaine, englobant la majeure partie de la protéine mature, y compris la région de liaison au récepteur. Cette conception peut permettre à l’anticorps de reconnaître les conformations de l’APOE libre de lipides et liée aux lipides.
• En Western blot, l’APOE est détectée à un poids moléculaire apparent d’environ 36 kDa. Il est conseillé de valider l’anticorps sur des échantillons de foie, de cerveau ou de plasma, où l’APOE est fortement exprimée. Utiliser des conditions réductrices appropriées, car l’APOE peut former des complexes liés par des ponts disulfure.
• En immunofluorescence/ICC, noter que l’APOE est principalement sécrétée. Une optimisation de la fixation et de la perméabilisation peut être nécessaire pour visualiser les pools intracellulaires, et un co-marquage avec des marqueurs d’organites (par exemple, du réticulum endoplasmique, de l’appareil de Golgi ou des endosomes) est recommandé.
• Pour l’ELISA, l’APOE peut être quantifiée dans le sérum/plasma ou les surnageants de culture cellulaire. Toutefois, les concentrations endogènes élevées dans le sérum peuvent nécessiter une optimisation de la dilution et l’établissement rigoureux de la courbe standard.
• Compte tenu du rôle des isoformes de l’APOE dans les maladies, les chercheurs peuvent envisager une validation spécifique des isoformes si l’anticorps reconnaît des épitopes communs. Cet anticorps est produit contre la séquence de référence (NP_000032.1), qui correspond à l’isoforme APOE3.

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