Anticorps polyclonal anti-53BP1 pour WB, IHC-P, ELISA - Q12888

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la protéine de liaison à TP53 1

• La protéine 53BP1, également appelée p202, TDRD30 ou p53BP1, est une protéine clé de réparation des cassures double-brin (CDB) impliquée dans la réponse aux dommages à l'ADN, la dynamique des télomères et la recombinaison de commutation de classe (RCC) lors de la génération d'anticorps. Références associées : PMID:12364621 PMID:17190600 PMID:21144835

• Elle favorise la réparation des CDB médiée par la jonction non homologue des extrémités (NHEJ) et contrarie spécifiquement la réparation par recombinaison homologue (RH) dépendante de BRCA1. Références associées : PMID:22553214 PMID:23333306 PMID:23727112

• Après un dommage à l'ADN, la phosphorylation de 53BP1 médiée par ATM favorise son interaction avec RIF1 et sa dissociation de TIRR, facilitant son recrutement sur les sites de CDB. Références associées : PMID:28241136

• 53BP1 est recruté sur les CDB en reconnaissant l'histone H2A monoubiquitinée en K15 (H2AK15Ub) et l'histone H4 diméthylée en K20 (H4K20me2). Références associées : PMID:17190600 PMID:23760478 PMID:27153538

• Il est nécessaire à la recombinaison de commutation de classe (RCC) des immunoglobulines, un processus qui génère des CDB de l'ADN. Références associées : PMID:23345425

• 53BP1 favorise également la NHEJ au niveau des télomères dysfonctionnels par interaction avec PAXIP1. Références associées : PMID:23727112

• Subcellulairement, 53BP1 se localise dans le noyau, sur les chromosomes et spécifiquement au niveau des centromères et des kinétochores.

• L'épissage alternatif produit plusieurs isoformes de 53BP1, ce qui contribue à la diversité fonctionnelle de la réparation de l'ADN.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• En tant qu'anticorps polyclonal produit contre un fragment recombinant (acides aminés 895-1031), il est attendu qu'il reconnaisse la protéine 53BP1 entière (~214 kDa) et éventuellement des produits de dégradation en Western blot. Optimisez l'exposition et les contrôles de chargement.
• Pour le WB, une gamme de dilution de départ typique de 1:500–1:2000 est souvent utilisée pour les anticorps polyclonaux ; cependant, la concentration de travail optimale doit être déterminée empiriquement dans votre système d'échantillons.
• En IHC-P, la récupération d'antigène peut être nécessaire en raison de la localisation nucléaire de 53BP1 ; validez la spécificité du coloration avec des contrôles tissulaires appropriés et envisagez l'utilisation d'un contre-colorant nucléaire.
• L'anticorps présente une réactivité croisée avec la 53BP1 de souris et de rat, comme confirmé par le fournisseur, ce qui le rend utile pour les études translationnelles ; cependant, l'alignement de séquence de la région de l'immunogène entre les espèces doit être pris en compte.
• Comme 53BP1 est une phosphoprotéine impliquée dans la signalisation des dommages à l'ADN, le traitement des cellules avec des agents endommageant l'ADN (par exemple, irradiation ionisante, étoposide) peut améliorer la détection de la formation de foyers en immunofluorescence ou moduler le signal en WB.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé pour capturer ou détecter des fragments recombinants de 53BP1 ou des lysats cellulaires ; les conditions appropriées de blocage et de lavage doivent être optimisées.

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