Anticorps monoclonal de lapin anti-Acétyl-p53 (K370) (P04637) pour Western Blot et ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de p53 (TP53)

p53 (Antigène tumoral cellulaire p53, TP53) est une protéine suppresseur de tumeur bien caractérisée qui agit comme un facteur de transcription multifonctionnel. Elle induit l'arrêt du cycle cellulaire, la réparation de l'ADN ou l'apoptose après liaison à ses séquences d'ADN cibles, maintenant ainsi la stabilité génomique et prévenant le développement du cancer (PubMed:11025664, 12524540, 12810724, 15340061, 17317671, 24051492).

Références associées : PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724, PMID:15340061, PMID:17317671, PMID:24051492

Les études de localisation subcellulaire montrent que p53 est principalement nucléaire dans des conditions normales mais peut se transloquer vers le cytoplasme, les mitochondries, les corps PML et le réticulum endoplasmique en réponse à divers stress cellulaires. Cette compartimentation dynamique est cruciale pour ses fonctions diverses, y compris la régulation de la transcription et l'induction de l'apoptose (PubMed:15340061, 22726440, 11025664, 12810724, 17170702, 25168243, 27323408, 28842590).

Références associées : PMID:15340061, PMID:22726440, PMID:11025664, PMID:12810724, PMID:17170702, PMID:25168243, PMID:27323408, PMID:28842590

p53 est exprimée de manière ubiquitaire dans la plupart des tissus, avec de multiples isoformes présentant des profils d'expression distincts. L'isoforme principale 1 est largement exprimée, tandis que d'autres isoformes montrent une présence ou une absence spécifique à certains tissus, ajoutant une couche de complexité régulatrice (PubMed:16131611).

Références associées : PMID:16131611

L'activité de p53 est étroitement contrôlée par de nombreuses modifications post-traductionnelles (MPT), notamment la phosphorylation, l'acétylation, la méthylation et l'ubiquitination. La lysine 370 (K370) dans le domaine régulateur C-terminal est un point chaud pour de telles modifications, subissant une méthylation et une diméthylation par des enzymes comme SMYD2 et d'autres, qui modulent la stabilité et l'activité transcriptionnelle de p53. Cet anticorps a été généré en utilisant un peptide synthétique acétylé autour de K370 de la p53 humaine (P04637), reconnaissant spécifiquement la forme acétylée à ce résidu. L'acétylation sur K370 est associée à une liaison accrue à l'ADN et à l'activation des gènes cibles de p53, la reliant à la suppression tumorale.

Références associées : PMID:17108971, PMID:22864287 (Pour la méthylation/diméthylation sur K370)

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'anticorps est produit chez le lapin et est monoclonal, garantissant une haute spécificité et une cohérence entre les lots.
• Pour le Western blot, envisagez d'enrichir les extraits protéiques nucléaires, car p53 est principalement nucléaire ; cependant, selon les conditions de stress cellulaire, p53 peut également être présente dans les fractions cytoplasmiques ou mitochondriales.
• Validez les performances de l'anticorps sur des échantillons témoins positifs connus pour exprimer la p53 acétylée, tels que des cellules traitées avec des inhibiteurs de désacétylase (par exemple, l'acide trichostatine A ou la nicotinamide) ou des agents endommageant l'ADN (par exemple, l'étoposide, la doxorubicine).
• Lors de l'utilisation de l'ELISA, enrobez la plaque avec le peptide immunogène (acétylé) et un peptide témoin non acétylé pour confirmer la spécificité.
• La réactivité croisée est confirmée pour l'humain et la souris, mais envisagez un alignement de séquences si vous testez d'autres espèces.
• Optimisez les dilutions de travail de manière empirique ; dilutions de départ recommandées pour le WB : 1:500 à 1:2000, pour l'ELISA : 1:1000 à 1:5000 (à titrer par l'utilisateur final).

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