Anticorps polyclonal de lapin Acétyl-HMGB1 (Lys29) (P09429) pour WB, IF/ICC, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la High Mobility Group Protein B1 (HMGB1)

• HMGB1 est une protéine chromosomique non histone très abondante et exprimée de manière ubiquitaire, qui agit comme un chaperon de l'ADN, régulant la transcription, la réplication, la réparation de l'ADN et la stabilité du génome. Il agit également comme un motif moléculaire associé aux dommages (DAMP) extracellulaire lors de lésions et d'inflammation. Références associées : PMID:33147444, PMID:27362237

• La localisation subcellulaire de HMGB1 est régulée dynamiquement. En condition basale, il réside principalement dans le noyau, mais il navigue continuellement entre le noyau et le cytoplasme. Lors de certains stimuli ou stress, il subit des modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation de résidus lysine clés au sein de ses signaux de localisation nucléaire (NLS1 : aa 28-44, NLS2 : aa 179-185), ce qui favorise son accumulation cytoplasmique et sa sécrétion active par une voie non conventionnelle médiée par les lysosomes. Références associées : PMID:12231511, PMID:17114460

• L'acétylation au niveau du Lys29 (K29) est l'une des modifications critiques qui régulent le trafic de HMGB1. L'hyperacétylation de la région NLS1, incluant le K29, perturbe l'import nucléaire et facilite la relocalisation de HMGB1 vers le cytoplasme puis sa libération finale dans l'espace extracellulaire, où il peut exercer des activités de type cytokine. Références associées : UniProt P09429

• Dans l'environnement extracellulaire, l'état redox de HMGB1 détermine sa fonction : HMGB1 entièrement réduit agit comme une chimiokine, HMGB1 avec pont disulfure comme une cytokine, et HMGB1 oxydé favorise la tolérance immunologique. HMGB1 extracellulaire se lie à des récepteurs tels que RAGE, TLR2 et TLR4 pour activer les réponses immunitaires innées, ce qui en fait un médiateur essentiel du sepsis, des maladies auto-immunes et du cancer. Références associées : PMID:23446148, PMID:23519706

• HMGB1 joue également un rôle dans la pathogenèse microbienne, facilitant l'entrée du SARS-CoV-2 et d'autres virus, et régulant l'autophagie et l'activation de l'inflammasome. Références associées : PMID:35239449, PMID:22696656

Conseils expérimentaux et techniques

• Compte tenu de la nature réversible de l'acétylation, ajoutez des inhibiteurs de désacétylases (par exemple trichostatine A, nicotinamide) dans les tampons de lyse pour préserver l'acétylation de HMGB1 lors de la préparation des échantillons.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire attendu de HMGB1 est d'environ 25 kDa, mais les modifications post-traductionnelles peuvent entraîner de légers décalages. Utilisez des cellules en phase logarithmique précoce ou des cellules stimulées comme contrôle positif.
• En immunofluorescence/ICC, le signal d'acétyl-HMGB1-K29 peut être majoritairement cytoplasmique ou extracellulaire après induction de l'acétylation (par exemple traitement au LPS), contrairement à la coloration nucléaire observée dans les cellules au repos.
• Pour les applications ELISA, envisagez d'utiliser cet anticorps comme réactif de capture ou de détection associé à un anticorps pan-HMGB1 pour quantifier spécifiquement HMGB1 acétylé dans les fluides biologiques.
• La réactivité croisée avec HMGB1 de souris et de rat a été indiquée ; cependant, une validation dans le système d'échantillon concerné est recommandée.

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