Acétyl-Histone H4-K5 Anticorps Polyclonal de Lapin (P62805) – Validé pour WB, IHC-P, ELISA, ChIP

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de l'Histone H4

• L'Histone H4 est un composant central du nucléosome, responsable de l'enroulement et de la compaction de l'ADN en chromatine. Cette compaction limite l'accessibilité de l'ADN, jouant ainsi un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. Références associées : UniProt P62805

• La protéine se localise principalement dans le noyau et est associée aux chromosomes. Il a été observé qu'elle est localisée dans le noyau lorsqu'elle est acétylée dans les spermatides au stade 11. Références associées : UniProt P62805

• L'Histone H4 subit de nombreuses modifications post-traductionnelles (MPT) sur sa queue N-terminale, qui constituent ensemble le "code histone". L'acétylation sur la lysine 5 (la cible de cet anticorps) est une modification clé associée aux états de chromatine active. Références associées : PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861

• D'autres modifications incluent la méthylation, la phosphorylation et diverses acylations, qui coordonnent la régulation de l'expression génique et d'autres processus utilisant l'ADN comme matrice. Références associées : UniProt P62805

Guide Expérimental et Conseils Techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été produit contre un peptide synthétique couvrant les acides aminés 1-100 de l'Histone H4 humaine, qui inclut la queue N-terminale et l'épitope Lys5 acétylé. Envisagez d'utiliser un peptide non acétylé ou un mutant (K5A) comme contrôle négatif pour confirmer la spécificité.
• Western Blot (WB) : L'Histone H4 a un poids moléculaire prédit d'environ 11 kDa. Assurez une séparation adéquate sur des gels SDS-PAGE à pourcentage élevé (ex. 15-18%) et vérifiez l'intensité de la bande normalisée par rapport aux contrôles de charge totale en histones (ex. Histone H3, H4 totale).
• Immunohistochimie sur Paraffine (IHC-P) : Une récupération antigénique est recommandée en raison de la nature compacte de la chromatine ; le tampon citrate (pH 6.0) ou Tris-EDTA (pH 9.0) peut être testé. Les profils d'acétylation peuvent varier selon le tissu et les conditions de fixation.
• ELISA : Cet anticorps peut être utilisé pour détecter des peptides d'histones acétylés ou des histones extraites par acide et directement immobilisées sur des plaques. Optimisez la concentration d'immobilisation et les étapes de blocage pour minimiser le bruit de fond.
• Immunoprécipitation de la Chromatine (ChIP) : Adapté pour la cartographie à l'échelle du génome des loci H4K5ac. Le temps de réticulation et les conditions de fragmentation de la chromatine doivent être déterminés empiriquement pour chaque type d'échantillon. Un Western Blot post-ChIP est conseillé pour confirmer l'enrichissement.
• Réactivité croisée : La séquence de l'immunogène est hautement conservée entre l'humain, la souris et le rat, et le fabricant prédit une large réactivité. Validez dans votre espèce d'intérêt par alignement de séquences et tests préliminaires.

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