Acétyl-Histone H3 (Lys4) Anticorps Monoclonal de Lapin pour WB, ChIP, IF | Q16695/P68431

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

• L'histone H3 est un composant central du nucléosome, qui enveloppe et compacte l'ADN en chromatine. Cela limite l'accessibilité de l'ADN aux machineries cellulaires qui nécessitent l'ADN comme matrice, jouant ainsi un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. Références associées : UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• L'accessibilité de l'ADN est régie par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (MPT) sur les histones, collectivement appelées le "code histone", et par le remodelage des nucléosomes. Ces MPT incluent l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation, la citrullination, l'ADP-ribosylation et diverses acylations. Références associées : PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:17194708

• L'histone H3 se localise principalement dans le noyau et est associée aux chromosomes tout au long du cycle cellulaire. Références associées : UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Alors que l'histone H3.1 canonique (codée par de multiples gènes, par exemple HIST1H3A) est exprimée de manière ubiquitaire, la variante H3.1t (H3-4, HIST3H3) est exprimée spécifiquement dans les cellules testiculaires, suggérant des rôles spécialisés dans l'organisation de la chromatine pendant la spermatogenèse. Références associées : UniProtKB Q16695

• L'acétylation de la lysine 4 sur l'histone H3 (H3K4ac) est une modification bien caractérisée associée aux promoteurs actifs et à la chromatine ouverte. Elle coexiste souvent avec d'autres marques activatrices et est lue par des protéines contenant un bromodomaine pour faciliter l'activation transcriptionnelle.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique acétylé correspondant aux résidus autour de la K4 de l'histone H3 humaine. En raison de la forte conservation de l'extrémité N-terminale entre les espèces, une réactivité croisée avec des échantillons de souris et de rat est prédite ; il est cependant conseillé de vérifier les performances dans le modèle expérimental spécifique.

• Pour les essais ChIP, envisagez de valider la spécificité de l'anticorps avec des peptides compétiteurs acétylés et non acétylés pour confirmer l'enrichissement au niveau des loci cibles.

• En Western blot, l'histone H3 migre à environ 15 kDa. Optimisez le pourcentage de gel et les conditions de transfert pour les protéines de faible poids moléculaire ; des lysats protéiques nucléaires ou extraits à l'acide sont recommandés pour un signal enrichi.

• Pour l'immunofluorescence, testez différents protocoles de fixation (par exemple, PFA 4% vs méthanol) et de perméabilisation, car ceux-ci peuvent influencer l'accessibilité de l'épitope et le bruit de fond.

• Étant donné la large gamme de modifications au niveau de l'extrémité N-terminale de H3, assurez-vous que la détection n'est pas affectée par les MPT voisines en utilisant des contrôles appropriés et, si possible, des histones mutantes ou des protéines recombinantes.

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