Acétyl-Histone H3-K9/K14/K18/K23/K27 Anticorps Polyclonal de Lapin (Q16695/P68431) pour WB, IF/ICC, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de l'Histone H3

L'histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Faisant partie de l'octamère d'histones, elle joue un rôle essentiel dans l'enroulement et la compaction de l'ADN, limitant ainsi l'accessibilité de l'ADN à la machinerie cellulaire qui l'utilise comme matrice. Cette base structurelle permet aux histones de réguler centralement la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique.

La queue N-terminale de l'histone H3 est sujette à de nombreuses modifications post-traductionnelles (MPT), notamment l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation et d'autres, qui constituent un "code histone" complexe. Ces modifications contrôlent dynamiquement l'architecture de la chromatine et l'expression des gènes. Plus précisément, l'acétylation des résidus lysine 9, 14, 18, 23 et 27 est connue pour neutraliser la charge positive des lysines, affaiblissant l'interaction entre les histones et l'ADN. Cela conduit à une conformation de chromatine plus ouverte (euchromatine) et est fortement associé à l'activation transcriptionnelle. Les marques d'acétylation à ces sites sont reconnues par des protéines contenant un bromodomaine et des remodeleurs de chromatine, facilitant le recrutement de la machinerie transcriptionnelle. Références associées :

• PMID:16627869
• PMID:19608861

L'histone H3 est principalement localisée dans le noyau et sur les chromosomes, où elle est incorporée dans la chromatine lors de la réplication de l'ADN (pour les variants dépendants de la réplication comme H3.1) ou de manière indépendante de la réplication (pour les variants de remplacement). La protéine H3.1 canonique (codée par de multiples gènes, incluant HIST1H3A–J) est exprimée dans de nombreux tissus, tandis que le variant spécifique des testicules H3.1t (H3-4, codé par HIST3H3) se trouve dans les cellules testiculaires. Les deux variants partagent la séquence conservée de la queue N-terminale contenant les lysines acétylées ciblées par cet anticorps.

Guide Expérimental et Conseils Techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique acétylé couvrant les lysines K9, K14, K18, K23 et K27 de l'histone H3 humaine. Cette conception multi-sites peut permettre une détection large de l'H3 hyperacétylée ; envisagez de vérifier la spécificité en utilisant des contrôles de peptide non acétylé dans des tests compétitifs.
• Pour le Western blot, l'extraction acide des histones ou un fractionnement enrichi en chromatine peut améliorer le rapport signal/bruit ; une normalisation de la charge avec un anticorps anti-histone H3 totale est recommandée pour tenir compte d'un éventuel masquage de l'épitope par d'autres MPT.
• En immunofluorescence/ICC, la perméabilisation avec du Triton X-100 ou de la digitonine peut améliorer la pénétration de l'anticorps dans le noyau ; les conditions de fixation doivent être optimisées pour équilibrer l'accessibilité de l'épitope et la morphologie.
• Les applications ELISA peuvent bénéficier de l'inclusion de revêtements à la fois avec des peptides acétylés et non acétylés pour confirmer la liaison sélective.
• La réactivité croisée prédite avec l'humain, la souris, le rat et d'autres espèces suggère une utilité dans de multiples systèmes modèles ; cependant, une validation dans le système d'échantillon spécifique et le contexte expérimental est essentielle.

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