Acétyl-Histone H3-K27 Anticorps Monoclonal de Lapin (Q16695/P68431) pour WB, ChIP, IF, IHC

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H3 (H3.1/H3.1t)

• L'histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Les nucléosomes enroulent et compactent l'ADN, régulant ainsi l'accès au matériel génétique pour la transcription, la réplication, la réparation et la recombinaison de l'ADN. Cette architecture est essentielle à la stabilité chromosomique et au bon fonctionnement cellulaire. Références associées : UniProt Q16695, UniProt P68431.

• Chez l'humain, il existe de multiples variants non alléliques de l'histone H3, incluant les protéines canoniques H3.1 dépendantes de la réplication (codées par des gènes tels que H3C1, H3C2, etc., GeneIDs : 8350, 8290) et le variant spécifique des testicules H3.1t (codé par H3-4, également appelé H3FT, HIST3H3). Le H3.1 canonique est exprimé de manière ubiquitaire, tandis que l'expression de H3.1t est restreinte aux cellules testiculaires. Références associées : UniProt Q16695 (spécificité tissulaire).

• H3.1 et H3.1t se localisent tous deux dans le noyau et s'associent aux chromosomes. Ils contiennent un domaine histone fold qui médie leur incorporation dans les nucléosomes et une queue N-terminale qui fait saillie hors du nucléosome, servant de plateforme pour une myriade de modifications post-traductionnelles (MPT). Références associées : UniProt P68431.

• La queue N-terminale de l'histone H3 est sujette à de nombreuses MPT incluant l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation, la citrullination et d'autres, collectivement connues sous le nom de "code histone". Ces modifications orchestrent la dynamique de la chromatine et les profils d'expression génique. L'acétylation des résidus lysine, comme à la position 27 (K27), est une caractéristique des régions de chromatine active incluant les amplificateurs et les promoteurs, facilitant une configuration de chromatine ouverte qui favorise l'activation des gènes. Références associées : UniProt P68431 (aperçu des MPT).

• L'anticorps décrit ici a été produit contre un peptide synthétique correspondant à la lysine 27 acétylée de l'histone H3 humaine (isoforme H3.1, NP_003520.1). Il reconnaît spécifiquement la forme acétylée et convient à la détection de cette modification dans diverses applications.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps a été généré en utilisant un immunogène peptidique synthétique acétylé ; considérez qu'il peut reconnaître l'épitope à la fois dans des conformations linéaires (dénaturées) et natives, le rendant adapté à des applications telles que le Western blot (WB), l'immunoprécipitation et les tests basés sur la chromatine.
• Pour le WB, le poids moléculaire prédit de l'histone H3 est d'environ 15 kDa. Cependant, les histones peuvent migrer de manière anormale selon les conditions de gel ; incluez des contrôles positifs appropriés (par exemple, un lysat de cellules entières HeLa) et des marqueurs de poids moléculaire.
• Dans les applications d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) et CUT&Tag, confirmez la spécificité et l'efficacité de l'anticorps en réalisant des tests de compétition par peptide et en incluant des loci cibles connus (par exemple, des amplificateurs actifs marqués par H3K27ac) comme contrôles positifs.
• En raison de la large réactivité croisée prédite (Humain, Souris, Rat et autres), cet anticorps peut convenir à diverses espèces, mais une validation dans le système d'échantillon spécifique est recommandée.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC) et l'immunohistochimie (IHC-P), l'accessibilité de l'épitope peut être influencée par les protocoles de fixation et de perméabilisation ; l'optimisation de ces étapes est conseillée.
• Les performances de l'anticorps en ELISA et dot blot (DB) peuvent être évaluées en utilisant des peptides acétylés versus non acétylés pour évaluer la spécificité.

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