Anticorps monoclonal de lapin Acétyl-Histone H3-K18 (Q16695/P68431) | Validé pour WB, IHC, ChIP, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H3

• L'Histone H3 est une protéine nucléosomique centrale qui enroule et compacte l'ADN en chromatine, limitant l'accessibilité aux machineries dépendantes de l'ADN et jouant un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. Références associées : UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Elle se localise dans le noyau et s'associe aux chromosomes. Références associées : UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• L'Histone H3.1 canonique est codée par plusieurs gènes (ex. H3C1, H3C2) et est exprimée de manière dépendante de la réplication dans les cellules somatiques. Le variant H3.1t (Q16695) est spécifiquement exprimé dans les cellules testiculaires. Références associées : UniProtKB Q16695

• L'Histone H3 subit des modifications post-traductionnelles étendues qui constituent le "code histone". L'acétylation au niveau de K18 (position 19 dans la séquence H3 canonique) est une marque clé liée à l'activation transcriptionnelle et à la réparation de l'ADN. Cette modification est régulée dynamiquement par les HAT et les HDAC. L'acétylation sur ce site a été documentée dans de nombreuses études. Références associées : PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708, PMID:35939806

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène est un peptide acétylé synthétique autour de K18 de l'Histone H3 humaine. L'anticorps monoclonal de lapin obtenu est censé reconnaître spécifiquement H3K18 acétylé, sans réaction croisée avec K18 non modifié ou d'autres sites d'acétylation. Validez la spécificité en utilisant des tests de compétition par peptide à la fois acétylé et non acétylé, ou en traitant les cellules avec des inhibiteurs d'HDAC.
• Pour le Western blotting (WB), une bande unique d'environ 16 kDa est attendue. Utilisez des contrôles de charge appropriés (ex. anticorps totaux contre l'Histone H3 ou contre l'extrémité C-terminale de H3) pour normaliser les niveaux d'acétylation. Les signaux d'acétylation peuvent être améliorés en traitant les cellules avec des inhibiteurs de désacétylase comme la trichostatine A (TSA) ou le butyrate de sodium.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), optimisez les conditions de récupération d'antigène et de perméabilisation. L'inhibition de la peroxydase endogène est recommandée pour l'IHC-P. Validez la coloration en comparant avec des contrôles d'isotype.
• Pour l'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), assurez-vous que les conditions de réticulation sont optimisées pour les modifications histones. Utilisez des loci de contrôle positifs et négatifs appropriés (ex. gènes activement transcrits vs loci silencieux). L'efficacité de l'enrichissement peut être vérifiée par qPCR.
• Compte tenu de la large réactivité croisée prédite (homme, souris, rat et autres), confirmez la réactivité dans l'espèce d'intérêt avant de réaliser des expériences à grande échelle. L'alignement de séquences montre une forte conservation de la région entourant K18 chez les vertébrés.
• Pour les applications ELISA et dot blot (DB), l'anticorps peut être utilisé pour détecter des peptides H3K18 acétylés ou des histones recombinantes. Envisagez d'utiliser un anticorps secondaire biotinylé et une streptavidine-HRP pour l'amplification du signal.

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