Anticorps monoclonal de lapin Acétyl-Histone H3-K14 (Q16695/P68431) pour WB, ChIP, ELISA

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H3

• L'Histone H3 est un composant essentiel du nucléosome, l'unité fondamentale de la chromatine, qui conditionne l'empaquetage de l'ADN et régule l'accès pour la transcription, la réplication, la réparation et la stabilité chromosomique. Les nucléosomes sont constitués d'environ 146 paires de bases d'ADN enroulé autour d'un octamère d'histones (deux exemplaires de chacun : H2A, H2B, H3 et H4).
• L'acétylation de la lysine 14 de l'Histone H3 (H3K14ac) est une marque épigénétique bien caractérisée associée aux gènes activement transcrits et aux régions de chromatine ouverte. Elle est catalysée principalement par des histone acétyltransférases comme GCN5/PCAF et est reconnue par les protéines contenant un bromodomaine. Références associées : PMID:16457588, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:17194708
• L'Histone H3.1 canonique (codé par plusieurs gènes dont HIST1H3A, etc., SWISS P68431) est exprimée de manière dépendante de la réplication pendant la phase S et déposée sur l'ensemble du génome. En revanche, l'Histone H3.1t (SWISS Q16695, gène H3-4/HIST3H3) est un variant spécifique des testicules qui remplace l'H3 canonique pendant la spermatogenèse.
• H3.1 et H3.1t partagent un degré élevé d'identité de séquence, y compris dans la région N-terminale contenant K14. L'immunogène de l'anticorps, un peptide synthétique acétylé au niveau de K14, garantit la reconnaissance spécifique de cette modification sur les deux variants.
• La localisation subcellulaire de l'Histone H3 est nucléaire, où elle est majoritairement associée aux chromosomes. La spécificité tissulaire de H3.1t est limitée aux cellules testiculaires, tandis que H3.1 est ubiquitaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été obtenu contre un peptide synthétique acétylé autour de K14 de l'H3 humain, garantissant une haute spécificité pour la forme acétylée. Des essais compétitifs avec un peptide non acétylé peuvent être utilisés pour confirmer la liaison spécifique de la modification.
• Western Blotting (WB) : L'Histone H3 migre à environ 15 kDa dans des conditions standard de SDS-PAGE. Pour une détection optimale, envisagez d'utiliser des extraits nucléaires et une extraction acide douce pour enrichir les protéines histones. Incluez toujours des contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, cellules traitées avec des inhibiteurs d'histone désacétylases vs non traitées).
• Immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) : Cet anticorps est référencé pour les applications de ChIP ; cependant, l'optimisation de la réticulation, du cisaillement de la chromatine et de la concentration d'anticorps peut être nécessaire selon les régions génomiques cibles et le type cellulaire.
• Immunofluorescence / Immunohistochimie (IF/IHC) : Une coloration nucléaire est attendue. Pour les coupes incluses en paraffine (IHC-P), un démasquage antigénique peut être nécessaire. Validez la spécificité de l'anticorps avec des peptides de blocage ou par comparaison avec des contrôles isotypes.
• Réactivité par espèce : L'anticorps présente une réactivité croisée avec l'homme, la souris et le rat en raison de la forte conservation de la séquence autour de K14. Pour d'autres espèces, vérifiez l'alignement de séquence avant utilisation.
• Généralités : En tant qu'anticorps monoclonal de lapin, il offre une haute affinité, une cohérence entre lots et un faible bruit de fond. Conserver à -20°C et éviter les cycles répétés de congélation-décongélation.

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